DNA赣氪制、DNA损伤修复、逆转录、转录.doc

DNA复制、DNA损伤修复、逆转录、转录 一、DNA的复制 DNA复制的一般特点： DNA复制是半保留复制（1985年，Meselson和Stahl的实验，明，该结论。他们使用一种含N15的氯化铵的细菌培养液，研究大肠杆菌的DNA复制过程。） DNA复制的生长点形成复制叉（复制叉指的是DNA双链解开分成两股，各自作为模板，子链沿模板延长所形成的Y字形结构） DNA复制是双向复制 （双向复制是指复制时，DNA从起始点向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉。在原核生物中，其DNA为环形DNA，只有一个复制起点，产生的两个复制叉在环形染色体和起点相对位置（起点旋转180）汇合后，复制完成。在真核生物中，每个染色体都有多个起始点，每个起点的复制叉遭遇到邻近的复制起点所形成的复制叉后停止复制） DNA复制为半不连续复制（同一个复制叉上只有一个解链方向，就是从5`到3`。而在复制时，一条链的合成方向和复制叉前进的方向相同，可以连续复制，成为前导链，但是另一条链的和成方向与复制叉前进的方向相反，不能顺着解链方向连续延长，只能待模板链解开至足够长度，才从5`到3`开始复制，在延长过程中，又要等待下一段有足够长度的模板，再次生成引物而延长，称为后随链。后随链所形成的一个个小片段称为冈崎片段。） 复制起点由多个短重复序列组成（复制起点是指DNA复制所必需的一段特殊的DNA序列，其一般特征为由多个短序列组成；能被多亚基的复制起始因子识别和结合；一般富含AT） DNA复制必须有引物（多数DNA复制使用RNA引物，提供只有的3`-OH末端，通过加入核苷酸不断延长。少数以DNA或者核苷酸为引物） DNA复制需要多种酶参与（A解旋要解旋酶，暴露复制模板链B延长只能利用引物3`-OH开始延伸C连接冈崎片段必须利用DNA连接酶） DNA复制具有高度忠实性 DNA聚合酶的特征 DNA聚合酶的底物是dNTP和引物-模板连接处（其中模板指引合成方向，引物提供3`端吸引底物的5`-P形成磷酸二酯键） DNA聚合酶的活化中心催化DNA合成（DNA聚合酶具有监控进入的dNTP形成A：T或者G：C配对的能力，还能区分rNTP和dNTP） DNA聚合酶的分类 原核生物的DNA聚合酶分别有DNA-polⅠ，DNA-polⅡ，DNA-polⅢ，而且他们都有3`-5`核酸外切酶的活性。 DNA-polⅠ DNA-polⅡ DNA-polⅢ 分子量（kd） 108 120 250 组成 单肽链 还不清楚 多亚基不对称二聚体 分子数 400 ？ 20 5`-3`核酸外切酶 有 无 无 基因突变后的致死性 可能 不可能 可能 其中， DNA-polⅢ是复制中真正起催化作用的酶，由a，ε，θ组成核心酶，两边的β起夹稳模板链并使酶沿模板滑动的作用。由六个亚基构成y-复合物，负责将可沿DNA链滑动的一对β-亚基加载于DNA上，使DNA聚合酶三具有持续合成能力。 DNA-polⅠ的二级结构以a-螺旋为主，可划分为A到R共18个a-螺旋，其中I到O容纳DNA链，H到I是无结构的氨基酸残基，把DNA链包裹起来，使其向一个方向滑动。但是，DNA-polⅠ的主要作用是对复制中的错误进行校读，对复制和修复中出现的空隙进行修补。 DNA-polⅡ基因发生突变，细菌仍能存活，推想他是其他两种酶缺失情况下暂时其作用的酶。 真核生物的DNA聚合酶至少有15种，但常见的有5种，都有5`-3`核酸外切酶的活性。 DNA-pol a β y δ ε 分子量 16.5 4.0 14.0 12.5 25.5 3`-5`核酸外切酶活性 无 无 有 有 有 功能 起始引发，引物酶活性 低保真度的复制 线粒体DNA复制 延长子链的主要酶，解螺旋酶活性 填补引物空隙，切除修复，重组 4. 复制保真性的酶学依据：A核酸外切酶活性在复制中辨认切除错配碱基并加以校正 B 复制的保真性依赖聚合酶对碱基的选择功能C靠模板的指引，子链延长严格遵照碱基配对规律。 5.原核生物的DNA生物合成 复制起始：DNA解链形成引发体 DNA解旋：解旋的过程主要由DnaA，B，C三种蛋白共同参与。有相同亚基组成的四聚体DnaA辨认并结合与串联重复序列即AT区，然后几个相同的DnaA蛋白结合成类似核小体。DnaB在DnaC蛋白的协同下，结合和沿解链的方向移动，并且逐步置换出DnaA。此时，就形成了复制叉。同时，SSB（单链DNA结合蛋白）在一定时间内使复制叉保持适当的长度，利于核苷酸依据模板参入。 引发体和引物：引物由引物酶催化合成的短链RNA分子。引发体就是含有解螺旋酶，DnaC蛋白，引物酶和DNA的开始复制区的复合结构。其作用过程：引发体的蛋白质组分在DNA链上移动（ATP供能），在适当的位置，引物酶催化生成引物，留有3`-O