甘蔗ABA生物合成关键酶SoNCED基因克隆及表达分析.pdf

南方农业学报 JournalofSouthernAgriculture ISSN2095—1191；CODENNNXAAB http：／1www．~nyxb．COWl DOI：10．3969~：issn．2095-1191．2017．01．I 甘蔗ABA生物合成关键酶 NCED基因 克隆及表达分析 谭秦亮 ，潘成列 ，杨丽涛 ，李杨瑞 ，3，5，欧克纬 ，朱鹏锦 · (广西亚热带作物研究所，南宁 530001； 广西大学 农学院，南宁 530004； 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点 实验室，南宁 530004； ／-am园生化股份有限公司，南宁 530007； 中国农业科学院 甘蔗研究中心／广西农业科学院 甘蔗 研究所农／业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室／广西甘蔗遗传改良重点实验室，南宁 530007) 摘要：【目的】克隆甘蔗体内9．顺式环氧类胡萝 卜素双加氧酶(9-cis．epoxycarotenoiddioxygenase，NCED)基因，分 析其基本生物学信息及在逆境胁迫下的表达分析，为进一步探讨s0NI 因在甘蔗脱落酸(ABA)生物合成途径中 的作用提供理论依据。方【法】以甘蔗品种桂糖21号为材料，待蔗苗长至5～6片叶时分别进行干旱、低温、高盐和氧化胁 迫处理，利用反转录PCR(RT．PCR)和cDNA未端快速扩增(RACE-PCR)克隆SoNCED~因，应用生物信息学方法对获 得的氨基酸序列进行分析，构建原核表达载体并进行目的蛋白的诱导表达，通过实时荧光定量PCR(qRT．PCR)分析 SoNCED；~g因在受到不同逆境胁迫时的表达情况。 【结果】克隆获得的SoNCED基因(GenBank登录号JQ314108)。 cDNA全长为2521bp，包含1个1827bp的开放阅读框(ORF)，编码608个氨基酸。多重序列比对及系统发育进化树分析 结果表明，SoNCED~因编码的氨基酸序列与其他植物有一定的相似性，尤其与禾本科c4植物高粱和玉米的同源性 最高，均达96％。成功构建s0rCED基因的原核表达载体pET．SoNCED，且通过IPTG诱导时可得到约66．0kD的蛋白， 确定该蛋白为sDrCED基因的表达蛋白。qRT．PcR结果分析表明，SoNCED~因在干旱、低温、高盐和氧化胁迫下均能 诱导表达，其中氧化胁迫下其表达量在6h时达峰值，其他胁迫方式下其表达量在12h时达峰值。【结论】成功克隆获得 甘蔗s C『ED基因，并从不同逆境下的表达情况推测该基因在甘蔗体内参与了干旱、低温、高盐和氧化等非生物胁迫 的调控过程。 关键词：甘蔗；基因克隆；SoNCED；表达分析；原核表达 中图分类号：$566．1 文献标志码：A 文章编号：2095—1191(2017)01—0001—08 Chlonln．ggamnd11eexprreesssslio0nnanaallyyssiissofbSOoNNCED genei。nKkteTyeennzzymmee forsugarcaneABA biosynthesis TANQin—liang。，PANCheng-lie，YANGLi—tap。。，LIYang—rui。’。’， OUKe—wei，ZHUPeng-jin (GuangxiSubtropicalCropsResearchInstitute，Nanning530001，China；CollegeofAgriculture，GuangxiUniversity， Nanning 530004，China；StateKeyLaboratoryforConservationandUtilizationofSubtropicalAgro-Bioresources，Nanning 530004，Chin