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proposal- proteomelab xl-i溶液中蛋白质相互作用分析
ProteomeLab XL-I溶液中蛋白质相互作用分析系统
美国贝克曼库尔特公司推出的ProteomeLab XL-I溶液中蛋白质相互作用分析系统采用专利的分析超速离心技术,是目前唯一利用物理学原理在模拟生理状态下研究溶液中蛋白质存在状态的经典技术。该技术广泛应用于生命科学、生物制药高分子科学等研究领域,论文发表,并且国际期刊要求提供分析超离表征蛋白特性的数据作为证据ProteomeLab XL-I分析系统主要应用于以下领域:
蛋白质与蛋白质相互作用ProteomeLab XL-I分析系统可用于研究溶液中蛋白质间作用与否及其亲和力,蛋白质复合物不同组分的比例等;
蛋白质与小分子/核酸间的相互作用ProteomeLab XL-I分析系统可以帮助分析小分子靶蛋白结合蛋白质与核酸间的结合;
蛋白质本身或其复合物的空间结构ProteomeLab XL-I分析系统可测定蛋白质的摩擦系数比(frictional ratio),进而推断蛋白质本身或其复合物的空间结构;
蛋白质修饰对空间结构及相互作用的影响ProteomeLab XL-I分析系统可用于分析蛋白质在经修饰后其空间结构有无变化;
不同条件下,蛋白质亚基比例的测定(AB2或A2B4)ProteomeLab XL-I分析系统可测定蛋白质的分子量进而拟合得到蛋白质亚基的比例。Biacore仅能提供分子比,而不能鉴定真正的亚单位比例
蛋白质在不同溶液条件下的自聚集现象ProteomeLab XL-I分析系统可用于分析不同溶液条件下的蛋白质自聚集现象。Biacore只限于不同蛋白质的结合实验,不能用于分子内自我结合的研究
多种分子间的共同作用ProteomeLab XL-I分析系统可用于分析多种分子间的相互作用,并能检测不同分子结合的比例;
蛋白质结晶条件的筛选ProteomeLab XL-I分析系统可检测不同的pH值、离子浓度、温度等条件下
蛋白质药物的配方研究ProteomeLab XL-I分析系统可用于测定不同药物配方中蛋白质药物的存在状态,从而应用于药物的配方研究。
ProteomeLab XL-I溶液中蛋白质相互作用分析系统基本原理
ProteomeLab XL-I分析系统备有紫外/可见光检测系统和瑞利(Rayleigh)干涉光学系统,既保证了在低浓度条件下工作的灵敏度和建立在样品最大光吸收基础上优化检测的选择性,又能够测量由于样品浓度改变导致的折射率的变化。这不仅提高了检测精度,同时还可以对更多种类的样品进行更大浓度范围的检测。
在高速旋转产生的强大的离心力作用下,分子量或构型不同的分子在溶液中的沉降系数不同。ProteomeLab XL-I的控制系统会实时扫描分子的沉降过程,并根据扫描所取得的数据计算出分子的特性。分析超离的分析方法主要有沉降速率(Sedimentation Velocity)和沉降平衡(Sedimentation Equilibrium)两种。
沉降速率是一项流体动力学技术。沉降速率实验中,样品被高速旋转,溶质分子向池底部移动,通过记录的数据来测定溶质分子运动的速率。运动速率用沉降系数表示,它取决于分子量、分子形状或构象。对于不同组分的样品,根据不同的沉降系数检测每个组分。
沉降平衡是一项热力学技术。沉降平衡试验在较低的速下进行,当沉降作用与扩散作用达到平衡时测定分子平衡浓度的分布。在平衡状态下,浓度的分布只决定于质量而与分子形状无关。ProteomeLab XL-I溶液中蛋白质相互作用分析系统技术特点
独一无二的在溶液中鉴定蛋白质的方法:由于是将蛋白质放在相互作用而不是孤立的状态中进行研究,通过检测蛋白质的构象(折叠或伸展)、聚集的可逆性(相互作用系统)、化学计量学(解离状态)和异质性(聚合状态),ProteomeLab XL-I更接近测定真实生理状态下的蛋白质;
不需要标准品:ProteomeLab XL-I的测量建立在热力学和流体动力学第一定律基础上,不需要标准品或校正;
非破坏性:样品无需添加任何化学品,离心技术对样品的聚集状态及构象没有破坏性;
可检测真正的亚单位比例:与Bicore方法仅能提供分子比不同,ProteomeLab XL-I可以鉴定AB2及A2B4(两者A:B同样是1:2)的差别;
多种不同条件的检测:可在不同的pH值、离子浓度、温度等条件下检测,而SEC(size exclusion chromatography) 的检测受缓冲溶液的限制,样品需溶于高盐或有机溶剂,以消除蛋白与介质间的非特异结合;
实验成本极低:实验中不需要任何其他试剂或消耗品;
实时在线检测:生物分子在相互作用发生时即被检测并采取数据;
FDA认可方法:蛋白聚集是产品产生免疫性的主要原因,ProteomeLab XL-I已成为FDA检测蛋白质药物非共价聚
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