第6篇 RNA剪切加工.ppt

加工的三种形式是： ① 减少部分片段：如切除5’端前导序列，3’端尾巴和中部的内含子； ② 增加部分片段：5’加帽,3’加ploy(A)和通过编辑加入一些碱基； ③修饰：对某些碱基进行甲基化等 1.1 tRNA 和 rRNA 的加工 原核生物tRNA和rRNA加工 真核生物tRNA和rRNA加工 原核生物tRNA和rRNA的加工 1.1.1 tRNA加工 原核生物tRNA初始转录本有三种 （1）多数为串连在一起的多顺反（polycistron） （2）少数为单顺反子 （3）由tRNA和rRNA串连组成 （1）RNaseP (由蛋白质和RNA组成的复合体)可切除E.coli前体tRNA 5’的前导序列（41nt）。该酶不识别特殊的序列，而是识别二级结构——发夹所组成的tRNA。 （2）去尾，形成3’－OH末端。由内切酶和外切酶共同参与。 （3）修饰。在前体的一些专一部位的碱基需要通过甲基化酶，硫醇酶，假尿嘧啶核苷化酶等的作用进行修饰成为特殊的碱基。 2. rRNA的加工 在E.coli中rRNA有7个转录单位,每个转录单位含有16S、23S、5S rRNA 及一个或几个tRNA。 rRNA前体的加工由RNase Ⅲ负责。 真核生物 tRNA 和 rRNA的加工 1. tRNA的加工 真核tRNA的基因与原核不同： 1）真核的前体分子tRNA数目多、单顺反子、成簇排列、有基因间隔区。 例如：爪蟾 tRNA基因数目＞200拷贝，酵母约有400个tRNA基因，是一种重复序列； 2）真核的前体分子 tRNA中含有内含子。 其加工过程要剪接内含子，都要加CCA 酵母tRNA前体的体外剪接 在未处理前电泳 只出现一条带 加入核酸内切酶 出现两条带 真核tRNA内含子的切除和其他内含子的切除是不同的： 1）没有交界序列，没有内部引导序列; 2）切除是依赖于蛋白质的RNase; 3）不是转酯反应； 4）其剪切原则上是依赖于对tRNA共同的二级结构的识别。 1.2 前体mRNA的加工 1.2.1 原核前体mRNA的加工 1.2.2 真核前体mRNA的加工 1.2.1 原核前体mRNA的加工 原核生物的mRNA一般不经过加工，由于转录和翻译偶联，中间没有加工的时间。 少数情况：多顺反子mRNA先被内切酶切成较小的单位再作为翻译的模板。 1.2.2 真核mRNA的加工 真核mRNA的加工一般要经过四个步骤： 1）mRNA的5’端加帽 2）mRNA的3’端多聚腺苷酸化（加尾） 3）切除内含子 4）修饰（对某些碱基进行甲基化） 1.2.2.1 mRNA的5加帽 成熟的真核生物并没有游离的5’端，只有所谓的帽子结构，该结构是通过转录加工加上去的。 mRNA的5’加帽是一个多步加工过程， 第一步是鸟苷转移酶（guanylyl transferase）将一个鸟苷酸加在5’ RNA的前端，产生5’-5’对接的磷酸二酯键。 第二步由鸟嘌呤甲基转移酶（quanine methyl transferase ）将一个甲基基团加到嘌呤环的7位氮原子使5‘帽子鸟嘌呤转变为7-甲基鸟嘌呤。 真核生物的帽子结构有三类 Type 0 cap: m7GpppX TypeⅠcap: m7GpppXm TypeⅡcap: m7GpppXmYm mRNA 5加帽的功能主要表现在4个方面： 1）保护mRNA5’端不被降解 细胞内存在许多RNA酶（RNase），它们可攻击游离的RNA分子。 RNA酶的降解从5‘端起始， 当在mRNA的5’端加上m7GpppG帽子后，带有3个连接磷酸的5‘帽可阻止RNase切割。 2）为核糖体识别mRNA提供信号，提高翻译效率 真核生物mRNA必须通过5帽结合蛋白才能接触核糖体，起始翻译。缺少加帽的mRNA由于不能被5帽结合蛋白识别，其翻译效率比加帽的mRNA低二十倍。 1.2.2.2 mRNA的加尾（3’端多聚腺苷酸化） 几乎所有真核生物成熟的mRNA末端都有一串约250个腺嘌呤核苷酸尾巴。 它们并非模板DNA编码，而是在转录完成后由poly (A) 多聚酶合成。 加尾位置不在转录物的最末端，而是在接近末端的内部位点。 在切除mRNA 3末端的一段序列后，再加上多聚腺苷酸。 真核生物mRNA poly (A)长度并非固定不变。