4.3饲料中粗蛋白的测定.ppt

* * 4.3 饲料中粗蛋白的测定 蛋白质是畜禽日粮中最主要的物质之一，蛋白质是生命的物质基础。测定饲料中蛋白质的含量，对于初步评价饲料的营养价值、合理开发利用饲料蛋白资源、提高产品质量、优化饲料配方、指导经济核算及生产过程控制均具有极重要的意义。饲料中蛋白质的检测十分重要！ * 一、蛋白质的测定方法 1．直接法 根据蛋白质的物理、化学性质直接测定蛋白质含量。 双缩脲法 Folin—酚试剂法（Lowry法） 紫外吸收法（最常见的280nm） 考马斯亮兰法（Bradford法）－染料结合法 * 一、蛋白质的测定方法 2．间接法 通过测定样品中总含氮量推算蛋白质含量（根据：每种蛋白质的含氮量是恒定的，N×6.25）。 凯氏定氮法（Kjeldahl）8~9小时 杜马斯燃烧定氮法（Dumas Combustion Method） —900℃~1200℃高温燃烧，燃烧过程中产生混合气体，其中的干扰成分被一系列适当的吸收剂所吸收，混合气体中的氮氧化物被全部还原成分子氮，随后氮的含量被热导检测器检测。3～5 分钟 强碱直接蒸馏法 —样品在强碱溶液中消煮，使蛋白质中的不稳定氮素以氨的形式释放出来，在 一定条件下，所释放的氨和样品中的含氮量成正比且有很好的相关性，建立 不稳定氮量与全氮量之间的回归方程。 ～20分钟 纳氏试剂比色法 * 二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量 19世纪（1883）建立的经典方法，结果可靠（最常用的标准方法），凯氏定氮法由于具有测定总有机氮量准确度高，可测定各种不同形态样品等两大优点，因而被公认为是测定食品、饲料、种子、生物制品、药品中蛋白质含量的标准分析方法。 但操作费时（8～9 h）——改良方法：加催化剂加快分析速度、仪器改进（自动、半自动凯氏定氮仪）。 * 二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量 1. 原理 各种饲料的有机物质在还原性催化剂（如CuSO4，K2SO4或Na2SO4或Se粉）的帮助下，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和其它有机态氮（如氨基酸、酰胺、核酸，在一定处理下也包括硝酸态氨）都转变成NH4+并与H2SO4化合成（NH4）2SO4，而非含氮物质，则以CO2↑，H2O↑，SO2↑状态逸出。然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。 * 二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量 1. 原理 ：使有机物脱水后被炭化为碳、氢、氮； ：将有机物炭化后的碳化为二氧化碳，硫酸则 被还原成二氧化硫； 2H2SO4 ＋C ＝2SO2＋ 2H2O ＋CO2 二氧化硫使氮还原为氨，本身则被氧化为三氧化硫，氨随之与硫酸作用生成硫酸铵留在酸性溶液中。 H2SO4＋2NH3 ＝ (NH4)2SO4 2NH2(CH)2COOH ＋ 13H2SO4 ＝ (NH4)2SO4 ＋ 6CO2 ＋ 12SO2 ＋ 16H2O ① 样品消化 浓硫酸具有脱水性 浓硫酸具有氧化性 * 二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量 1. 原理 消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出的氨态氮，用硼酸溶液吸收之并与之结合成为四硼酸铵。 ② 蒸馏 2NaOH＋ (NH4)2SO4＝ 2NH3↓＋ Na2SO4 ＋ 2H2O 2NH3 + 4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O * 二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量 1. 原理 以甲基红－溴甲酚绿作指示剂，用HCl标准溶液（0.1mol/L）滴定，根据标准酸的消耗量，即可计算有机氮的含量。而后，根据不同的饲料再乘以一定的系数（通常用6.25系数计算），即为粗蛋白质的含量。 ③ 滴定 (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3 * 二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量 凯氏定氮瓶（或消化管）及蒸馏装置 硫酸铜 硫酸钾 硫酸 2%硼酸溶液 40%氢氧化钠溶液 0.2%甲基红 0.2%溴甲酚绿 0.2%甲基红及0.2%溴甲酚绿的1+5混合指示剂 0.1mol/L的标准盐酸溶液(或1/2硫酸溶液) 2. 主要仪器及试剂 * 二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量 3. 测定步骤 第一步 样品消化 称取适量样品0.5~1g（含氮量5～80mg），无损失（用滤纸包好）地放入