畜禽大肠杆菌对七种常见抗菌药的敏感性试验.pptVIP

畜禽大肠杆菌对七种常见抗菌药的敏感性试验 2010届动医专升本2班 董卫超 论文提要 一、前言 二、材料与方法 三、结果 四、讨论 一、前言 近期随着畜禽养殖业的快速发展，大肠杆菌病已成为危害养殖业的主要传染病之一。近年来，由于长期大量抗菌药物的滥用，造成大肠杆菌耐药菌株不断产生，尤其是兽医临床已出现多重耐药性、超强耐药的大肠杆菌，即同时对兽医临床常用抗菌药物：氨基糖苷类、四环素类、氯霉素类和氟喹诺酮类等产生耐药性，导致常规药物的药效降低甚至消失，临床可供选择药物的余地越来越少，大肠杆菌病的防治难度日益增加，给养殖业造成了严重的损失 鉴于畜禽大肠杆菌耐药性的普遍产生，为了更好的指导临床用药及减少耐药菌株产生，故此，对河南部分地区的畜禽大杆菌进行简单药敏分析。 二、材料与方法 病料：采自河南省内的养殖场。 培养基：血平板培养基、营养肉汤、麦糠凯琼脂、大肠杆菌显色培养基等。 抗菌药物名称：阿米卡星、强力霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、克林沙星、加替沙星、SMM/TMP(5:1)。 仪器：洁净工作台、LRH-250-Ⅱ微电脑控制生化培养箱、96孔V 型反应板、BS224S 型电子天平等。 细菌的分离培养与保存 内脏 病死动物 血平板划线37℃培养24h 接种入新鲜肉汤 37℃培养24h 肉汤培养基 麦康凯划线培养 4℃保存备用 挑取单个菌落 接种肉汤培养24h 疑似大肠杆菌 菌液 药液的配制 用电子天平称取适量的各种药物无菌配制成浓度为1280 μg/mL 的药液5 mL。 恩诺沙星 氟苯尼考 克林沙星 少许NaOH+无菌蒸馏水 少许NaOH+无菌蒸馏水 N,N-二甲基甲酰胺+少许乙醇 恩诺沙星药液 氟苯尼考药液 克林沙星药液 菌液的配制 吸取5 μL 保存菌液 接种于5 mL新鲜肉汤中 37℃过夜培养 充分混匀，进行万倍稀释至105 CFU/mL 吸取2 μL菌液于平皿中同20 mL 新鲜肉汤 最小抑菌浓度的测定 第12 列中，前4 孔为阴性对照， 后4 孔为阳性对 照。 1 2 3 4 5 6 7 11 8 12 9 10 A B C D E F G H 第1列：加入各 药液60 μL。 从后向前 每孔依次 加入60 μL 菌液至第 一孔。 保鲜膜覆盖后标记菌株，然后置37℃ 培养18~24 h 后，观察结果。 与第一孔药 液吹打混匀 后，吸取60 μL混合液至 第二孔，吹 打混匀，以 此倍比稀释 至第11 孔。 微量肉汤稀释法 三、结果 1 细菌的鉴定观察结果 2 畜禽大肠杆菌对不同药物的MIC值 3、畜禽大肠杆菌对各组药物的耐药率 4、多重耐药谱统计 1 细菌的鉴定观察结果 观察所分离的细菌生长情况，在麦康凯培养基上成桃红色、扁平、圆形、隆起、光滑、湿润的菌落，为疑似大肠杆菌。另外在麦康凯培养基上还培养出桃红色和黄白色透明状两种菌落，将这两种菌落分别接种于大肠杆菌鉴别培养基上做鉴别培养，结果显示：在麦康凯培养基上显示桃红色的菌落经大肠杆菌显色培养基培养呈蓝绿色的，可鉴定为大肠杆菌，而在麦康凯培养基上显示黄白色透明状的菌落，在大肠杆菌显色培养基上显示无色，所以可能是其他菌种。将确定为大肠杆菌的4℃ 保存备用，进入本试验。  2、不同药物对大肠杆菌的MIC值 细菌 氟苯尼考 多西环素 阿米卡星 SMM/TMP (5/1) 恩诺沙星 加替沙星 克林沙星 1 320 160 0.625 160 40 5 1.25 2 640 160 0.625 640 640 10 5 3 640 160 0.625 640 160 10 2.5 10 640 160 0.625 640 40 10 2.5 12 640 160 0.625 640 20 5 1.25 14 640 160 0.625 640 640 5 2.5 19 160 20 10 80 10 2.5 1.25 21 640 160 320 640 80 10 1.25 22 640 160 80 640 20 2.5 1.25 24 5 80 20 80 10 5 1.25 27 320 640 1.25 640 40 40 2.5 28 640 80 0.625 640 640 20 10 29 640 160 1.25 640 80 10 5 30 160 80 0.625 640 20 5 1.25 31 640 80 1.25 640 640 20 2.5 33 640 80 640 640 640 20 2.5