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第八课 胚胎干细胞的自我更新和亚全 能性的分子基础 （再续） GSK-3和Wnt/ β-catenin信号通路  GSK3是Wnt信号通路中的一个重要的激酶， 它能够抑制整个Wnt通路的功能。抑制ES细胞 中GSK的活性，进而激活Wnt通路，可以显著 增强ES细胞的多能性。 Development Cell, 2007,12(6):957–971 GSK-3 DKO引起细胞内β-catenin的积累 GSK-3 DKO增加了Axin2 的表达水平 Double KO GSK-3α/β Induced Nuclear Accumulation of β-catenin DKO GSK-3α/β attenuated ES cell differentiation in the absence of LIF “2i” media A completely defined, serum- and feeder-free medium for the derivation and long-term maintenance of true, germline competent mouse and human pluripotent stem cells (ES and iPS cells) 2i= MEK inhibitor + GSK3 inhibitor 维持mES细胞全能性的信号通路总结 二、人ES cells的全能性  与mESCs不同的是，hLIF不能维持人胚胎干细胞 (hESCs) 的亚全能性和自我更新。  BMP信号不仅不能维持hESCs的全能性，而且还促 进了hESCs向滋养外胚层和原始内胚层的分化。  hESCs的体外增殖培养需要bFGF和小鼠饲养层细胞 或其条件性培养液，但不需要LIF。 参与维持人胚胎干细胞全能性 的信号通路 1. Wnt通路 2. TGF-β家族的Activin ／Nodal LIF Stat-3 activation does not sustain HESC self-renewal Nature Medicine, 2004,10:55 - 63 LIF/Stat-3 activation does not sustain hESC self-renewal Oct4 staining mESC BIO通过抑制GSK-3活力，激活Wnt 通路 Bio是GSK-3的抑制剂 Topflash是Wnt通路中含TCF结合位点启动子的报告基因载体，它的活力反应了 Wnt通路的活化程度。Fopflash是对结合位点进行突变的对照报告载体。 hESCs cultured with BIO showed nuclear accumulation of β-catenin β-catenin staining DAPI Activation of Wnt signaling by BIO maintains the undifferentiated state of mESCs Activation of Wnt signaling by BIO maintains the undifferentiated state of hESCs