血清药理研究(张利).pptVIP

* 血清药理研究 1.原理 2.研究现状 3.发展前景 4.实际操作中出现的问题 原理 血清药理学实验方法是首先给动物服药，然后取其血清作为药物源进行药理学观察。粗制剂和复杂的成分经过消化已吸收分布，代谢排除等体内过程，再取含药的血清进行药理实验，比较接近药物体内环境中产生药理作用的真实过程，适用于中药，特别是复方进行药效评价及其作用机制的研究，还可进行血清药化学及药动力学的研究。 含药血清能更好的反映药物在体内环境中产生药理效应的真实过程，在理论上更具科学性和真实性。用含药血清进行中药药效作用的观察、研究，增加了中药药理研究的方法和手段，有利于从细胞水平上探讨中药的作用机理。 原理 研究现状 血清药理学是日本学者Ｈｉｒｏｋｏ Ｉｗａｍａ在１９８４年第一届和汉医药学会上首次提出的。１９８８年，日本国东京都医院的田代真一正式提出了“血清药理学”的概念。 １９９０年以后，血清药理学开始在我国受到从事中药研究人员的关注。该方法主要针对中药及其复方复杂多样的化学成分特点，用含药血清代替煎剂或粗提物进行体外实验，它克服了中药粗制剂直接进行体外实验的缺点，其结果的可信度明显优于中药粗制剂直接用于体外实验。而且它结合了现代化学、微生物学学、分子生物学、药理、临床等学科，血清药理研究方法不断地被应用于一些中药及西药的药理学研究，并取得了一定的进展。 研究现状 目前，中药的开发和研制主要是寻找药物的有效成分或有效部位、制备精炼的中药制剂、提高临床疗效和降低毒副作用。血清药理学实验方法的建立，使这一目的的实现变得更为切实可行。主要表现在以下几个方面：①在体外药理学实验中，进一步验证和评价药物的疗效，运用含药血清对有效药物和／或药物的有效成分进行初步筛选；②血清药理学与血清药化学、中药分析化学、中药药动学，尤其是中药胃肠药动学、中药血清药动学、中药证治药动学等相结合，将有利于药物有效成分或部位的寻找和鉴定；③对药物的制剂工艺进行比较和筛选；④对药物的作用机理做更深入的研究。 血清药理学因其方法学上的特点使其在中医学的研究中已显示出一定的优势：①从中药复方本身来讲，可克服体外实验不能直接观察到的复方经体内胃肠吸收、生物转化后的综合整体药理效应；②从方法学上解决了中药复方直接应用于离体实验的难点，使中医药研究能在离体实验中直接与分子生物学技术相结合，从而推动中医药现代化的进程；③对含药血清的成分进行药效、药动学研究并与原复方粗提物进行比较，可以发现中药复方发挥药效作用的物质基础，为探讨中药复方作用规律提供新思路；④可以用来验证一些中医学的基础理论。如君臣佐使、中药配伍理论及一些中医基础理论的实际价值，有助于为中医理论的现代化研究提供依据。 研究现状 发展前景 目前，血清药理学已经应用到越来越多的研究领域中，为中药复方的研究方法开辟了研究思路，拓宽了研究领域，能较为客观真实地阐明中药的药效和作用机制，并在一定程度上揭示中药复方在胃肠内代谢过程中活性成分的转化和改变，提高了体外实验的可信性和可靠性。但由于血清药理学方法在我国研究起步较晚，许多方面还需要经验和数据的累积，且在某些实验，如凝血、纤溶等研究中采用血清药理学研究方法不适宜。因此，其局限性不容忽视。血清药理学若能与血浆药理学、药动学、血清药化学、免疫学、分子生物学、微生物学结合研究，则有助于研究的规范与深入，必将加速中药走向现代化的进程。 实际操作中出现的问题 操作方法 1 存在的问题 2 讨论 3 SD大鼠雌雄各3只，体质量(200~300)g，禁食12 h，自由饮水，口服给予白芷超微粉末0.54g/100g，分别于给药0.5、1、2、3、4h后，于眼眶取血2 ml ，所有血液样品立即离心(3 000 r·min-1)10 min，分离得到血浆转移至于净塑料EP管。 操作方法 取大鼠空白血浆200μl置5．0 mI 离心管中，乙腈500μl沉淀蛋白，涡旋5 min，离心(3 000 r·min-1)10 min，取上清液转移至另一5 mL试管中，于40℃ 水浴中氮气吹干，加200μl流动相充分溶解试管中的残留物，涡旋3 min，离心(3 000 r·min-1)10 rain，取上清液20μl进样。 血浆样品预处理 存在的问题 从胃肠吸收的中药有效成分在体内是进入血浆，而非血清； 凝血过程有一系列酶生成，同时刺激白细胞释放溶酶，这些酶可能降解某些中药成分； 凝血酶刺激血小板与白细胞释放大量生物活性物质； 凝血过程伴有纤溶、补体、激肽等系统活化； 制备与灭活血清过程会导致中药成分与中药介导体内释放物质损失。使用ＨＰＬ