常用缓冲液和培养基配方.docVIP

常用缓冲液及培养基配方 LB液体培养基： Bacto-蛋白胨 10g 酵母抽提物 5g 氯化钠 10g 加950ml蒸馏水溶解，用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。 LB固体培养基： 每升LB液体培养基中加入12g琼脂粉，高压灭菌后保存。 SOB液体培养基 Bacto-蛋白胨 20g 酵母抽提物 5g NaCl 0.5g 加950 ml水溶解，加入250mmol/L KCl 溶液10ml，用5 N NaOH调pH至7.0，定容至1000 ml，高压灭菌后保存。使用前加入5ml经灭菌的2mol/LMgCl2。 SOC液体培养基 SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为20mmol/L。 麦康凯固体培养基 每1000ml水中加52g培养基粉，煮沸溶解后分装，高压灭菌。 NA固体培养基 牛肉浸膏 3g 酵母浸膏 1g 蛋白胨 蔗糖 琼脂粉 5g 10g 15g 加950ml蒸馏水溶解，调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。 TB培养基 ： 将下列组分溶解在0.9L水中： Bacto-蛋白胨 12g 酵母抽提物 24g 甘油 4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L?KH2PO4/ 0.72?mol/L?K2HPO4的溶液。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌。 溶液Ⅰ 葡萄糖 2.25 g 50mmol/L 1mol/L Tris·Cl(pH8.0) 6.25ml 20mmol/L 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 5ml 10mmol/L 调pH至8.0后，用水定容至250 ml，高压灭菌后保存。 溶液Ⅱ 10 mol/L NaOH 2ml 10% SDS 10ml 用水定容至100 ml，现配现用。 溶液Ⅲ 5 mol/L 醋酸钾 60ml 冰醋酸 11.5ml 水 28.5ml 高压灭菌后保存。 高盐TE缓冲液 10mmol/L Tris.Cl, pH 8.0* 0.1mmol/L EDTA, pH 8.0* 1mol/L NaCl 于室温保存（可在几年内保持稳定） CTAB抽提液 2%（w/v）CTAB(古立烷基三乙基溴化铵) 100mmol/L Tris.Cl,pH 8.0 * 1.4mol/L NaCl 于室温保存（可在几年内保持稳定） CTAB/NaCl 溶液（10% CTAB/0.7mol/L NaCl） 在80ml H2O中溶解4.1g NaCl,缓慢加入10一CTAB（十六烷基三乙基溴化铵），同时加热并搅拌。如果需要，可加热至65℃溶解。定容终体积至100ml. CTAB沉淀液 1%（w/v） CTAB 50mmol/L Tris.Cl, pH 8.0 10mmol/L EDTA, pH8.0 PBS缓冲液： 十二水磷酸氢二钠 15g 磷酸二氢钾 1g 氯化钠 40g 氯化钾 1g 定容至5000ml, 调pH至7.2。 ELISA包被液： 碳酸钠 1.59g 碳酸氢钠 2.93g 定容至1000ml，调pH至9.6。 ELISA洗涤液(0.01M PBST)： 5000ml PBS中加2.5ml吐温-20 显色液（底物溶液-邻苯二胺溶液）： pH5.0 磷酸盐-柠檬酸缓冲液：0.1 M 柠檬酸（19.2 g/L） 24.3 ml、0.2 M Na2HPO4 (28.4 g/L) 25.7 ml、 临用时取上述溶液10 ml, 加邻苯二胺（OPD）4 mg，溶解后加入30％H2O2 15 μl； 终止液：2 M H2SO4 TE缓冲液(pH8.0)： Tris·HCl(pH8.0) 10mmol/L EDTA(pH8.0) 1mmol/L 高压灭菌。 10% SDS： 10g十二烷基硫酸钠溶于90ml水中，加热至68℃溶解，加几滴浓盐酸调pH至7.2，定容至100ml，过滤除菌。 50×TAE缓冲液 Tris 242 g 冰醋酸 57.1 ml 0.5 mol/L EDTA(pH8.0) 100 ml 用水定容至1000 ml，用时稀释50倍。 5×TBE缓冲液： Tris碱* 54g 硼酸 27.5ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 20ml 加水定容至1000ml，0.5×使用。 6×DNA上样缓冲液： 0.25%溴酚蓝* 0.25%二甲苯青FF* 30%甘油 甲醛凝胶加样缓冲液(DEPC处理水配制)： 50%甘油 1mmol/L EDTA(pH8.0) 0.25溴酚蓝* 0.25二甲苯青FF* 适量溴化乙锭* 20×SSC： 氯