基因拷贝数与甲醇浓度对重组毕赤酵母产华根霉脂肪酶的影响.pdfVIP

基因拷贝数与甲醇浓度对重组毕赤酵母产华根霉脂肪酶的影响.pdf

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微 生物学通报 MAR20,2011,38(3):301-309 M icrobiologyChina ◎ 2011byInstituteofM icrobiology.CAS tongbao@im.ac.cn 基因拷贝数和 甲醇浓度对重组毕赤酵母产 华根霉脂肪酶的影响 李飞 喻晓蔚 沙冲 徐岩 (江南大学生物工程学 院 教育部工业生物技术重点实验室 江苏 无锡 214122) 摘 要:将华根霉脂肪酶基 因克隆到 甲基营养型毕赤酵母 中表达,以甲醇利用快型菌株为宿主, 在 7L发酵罐水平对脂肪酶基 因拷 贝数分别为3、5、6的3株基 因重组菌一 xYRCL一3、XYRCL.5、 XYRCL.6进行高密度发酵调控 ,同时研究了甲醇浓度对表达华根霉脂肪酶的影响。结果表明, XYRCL.5在相 同条件下发酵产酶能力高于 XYRCL.6和 XY RCL一3,最适 甲醇诱导浓度控制在 0.1%士0.02%时,酶活可达到 12500U/mL,菌体干重达到204g/L,蛋白浓度也能达到 8.02g/L。 关键词:基 因拷 贝数,甲醇诱导浓度,毕赤酵母,华根霉脂肪酶 Impactofgenedosageandmethanolconcentrationon n T ‘ ■ ‘ ‘ 1 ‘ … 1 · ● ● lZopus ,zlnenstsrecOm binantliDaseDrocluction in LIFei YU Xiao.W ei SHA Chong XU 5(an ‘ (KeyLaboratoryofIndustrialBiotechnology,MinistryofEducation,SchoolofBiotechnology,JiangnanUniversity,Wuxi, Jiangsu214122,China) Abstract:TheRhizopuschinensislipasegeneswasclonedandexpressedinMutmethy1otrophic Pichiapastoriswith differentgenedosage.Thehigh。density fermentationoftherecombinantPichia pastorwithgenedosageofthree(XYRCL-3),five(xvRCL一5)andsix(XYRCL一6)wasinvestigated on7一literfermenter.TheimpactofmethanolcOncentratiOnonRhizopuschinensis1ipaseexpressionwas alsoexplored.OurresultsindicatedthatmoreRhizopuschinensis1ipasewasproduced inXY RCL.5 producedthanthatofXY RCL.6andXY RCL-3underthesameconditions.Whenmethanolconcentra— tionwascontrolledat0.10%i0.02%.theenzym eactivityofRhizopuschinensislipaseproducedbyXY RCL一5couldachieve12500U /mL.andthedryweightofXY RCL.5andproteinconcentrationcould reach204g/Land8.02g/L,respectively. 基金项 目:国家 863计划重点项 目(No.2010AA101501,2008AA10Z304);国家 自然科学基金项 目(No

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