枯草芽孢杆菌sacB基因的功能验证和应用.pdf

590 核 农 学 报 　2008 ,22 (5) :590～594 　 J ournal of N uclear Agricultural Sciences ( ) 文章编号 2008 0559005 枯草芽孢杆菌 sacB 基因的功能验证及应用 1 1 ,2 1 1 1 吴 　菁 　刘秀敏 　张 　维 　陈　明 　林 　敏 ( 1 中国农业科学院生物技术研究所 ,北京 　100081 ;2 河北交通职业技术学院 ,河北 石家庄 　050091) ( ) 摘 　要 :本研究将枯草芽孢杆菌 B acillus subtilis 基因组 DNA 中克隆的 14 kb sacB 基因片段连接到表达 载体 p ET28a ( + ) ,构建了 sacB 基因表达载体 p SacB 。通过测定蔗糖水解产生的葡萄糖具有的还原性 , ( ) 确定 sacB 基因产物具有蔗糖果聚糖酶活性 。该基因表达后 ,导致大肠杆菌 Escherichia coli 细胞不能在 含 5 %蔗糖的培养基中生存 。同时发现 sacB 基因也能赋予耐辐射菌株Deinococcus sp . BR501 蔗糖敏感 性 。利用条件致死 sacB 基因的这一特性 ,我们分析了 D . sp . BR501 的突变率 ,结果表明DNA 错配修复 (Δ ) 缺失突变株 mutS 1 的突变频率明显高于野生型 。因此枯草芽孢杆菌 sacB 基因可作为验证 DNA 损伤 修复能力的一种筛选标记 。 关键词 :枯草芽孢杆菌 ; sacB 基因;蔗糖果聚糖酶 ;突变率 FUNCTIONAL IDENTIFICATION OF Bacillus subtilis sacb GENE AND ITS APPLICATION WU Jing 　L IU Xiumin 　ZHAN G Wei 　CHEN Ming 　L IN Min ( 1 B iotechnology Research Institute , Chinese Academy of Agricultural Sciences , Beij ing 　100081 ; 2Hebei J iaotong Vocational Technical College , Shij iazhuang , Hebei 　050091) Abstract :In this study