毛细管电泳法的特点与CE-MS的构造.ppt

毛细管电泳法的特点 1.毛细管电泳具备如下优点： 　（1） 高效 塔板数目在105-106 片/m 间，当采用CGE 时 ??毛细管电泳色谱图，塔板数目可达107 片/m 以上； 　　（2） 快速 一般在十几分钟内完成分离； 　　（3） 微量 进样所需的样品体积为nL 级； 　　（4） 多模式 可根据需要选用不同的分离模式且仅需一台仪器； 　　（5） 经济 实验消耗不过几毫升缓冲溶液，维持费用很低； 　　（6） 自动 CE 是目前自动化程度较高的分离方法。 2.毛细管电泳的缺点 （1） 由于进样量少，因而制备能力差； 　　（2） 由于毛细管直径小，使光路太短，用一些检测方法（如紫外吸收光谱法）时，灵敏度较低； （3） 电渗会因样品组成而变化，进而影响分离重现性。 3.与传统电泳技术相比，具备的特点 （1）分离效率高 （2）分离模式多：毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、胶束电动毛细管色谱、毛细管等电聚焦 、毛细管等速电泳等。 （3）应用范围广：既能分析有机和无机小分子，又能分析多肽和蛋白质大分子；既能用于带电离子的分离，又能用于中性分子的测定。 （4）最小检出限低 （5）分析成本低 （6）样品用量少 （7）仪器简单 （8）环境友好 4.与高效液相色谱相比，具备的特点 毛细管电泳(CE)与质谱(MS)联用技术(CE-MS) 能快速分离微体积样品中的化合物，及其高效分离和基于分子量鉴定化合物的能力，使它成为分析复杂生物样品的一种非常有价值的方法。 另外，在各种广泛的诸如毛细管区域电泳，毛细管等电点调焦，和在线等速电泳等技术已经和MS结合。这些优点使得CE-MS在分析复杂生物混合物中广泛使用。CE-MS已经成功地广泛应用于复杂化合物地分析包括氨基酸，蛋白质消化，蛋白质混合物，单个细胞，寡核苷酸，和各种小分子相关的制药工业。 CE-MS的分类 CE-MS在线结合的仪器主要包括三个部分:即CE系统，CE-MS接口和MS检测器。 目前，成功地应用于CE-MS接口中的离子化技术有连续流-快原子轰击（CF-FAB）、离子喷雾（IS）、电喷雾（ESI）、大气压化学电离、基质辅助激光解吸离子化和等离子体解吸离子化技术等。其中电喷雾电离是最常用、最成熟的技术。 CE-MS的结构 电喷雾技术 用来产生MS分析的所需的离子技术，特别适用于与大分子的质谱分析，采用ESI，大分子在离子化过程中不会碎裂。 电喷雾技术的优点 接口技术 接口技术是实现CE-MS 联用的关键所在。CE-MS联用分为在线联用和离线联用。CE-MS离线联用的关键是对已分离样品的有效收集,并不涉及真正意义上的联用接口技术;而且与离线联用相比, CE-MS在线联用具有样品损失少、自动化程度高、分析速度快等优点,其应用要比离线联用广泛得多。CE-MS在线联用需要设计合适的接口,能够将已分离的样品全部转移到质谱仪中,同时实现样品快速高效的离子化，同时接口对技术要求很高。 CE-ESI-MS接口主要分为鞘液接口和无鞘液接口两种。 鞘液接口技术 鞘液接口技术是最早出现，其优点在于通过提高样品流速使得喷雾更加稳定,有利于形成稳定的电流回路,同时可改变CE运行缓冲液的组成, 使其满足ESI源的检测要求。主要有低流速( low-flow )鞘液接口，多通道的CE-ESI-MS联用鞘液接口。Chang等设计了低流速鞘液接口,他们将毛细管末端套在装有鞘液的离心管中,鞘液低速流出与CE 流出物混合,离心管中插入一铂丝作为电极以构成电流回路; 低流速可以降低鞘液的稀释作用,同时铂丝构成电流回路可以避免因流速低所造成的断流。 无鞘液接口技术 无鞘液接口技术由于不存在任何稀释效应而逐渐受到研究者的青睐。 液接型接口是无鞘液接口技术中比较特别的一种。与其他无鞘液接口相比, 液接型接口可以通过液接液体来改变CE运行缓冲液的组成, 使其满足电喷雾离子源的要求。与鞘液接口相比, 液接型接口不存在鞘液的稀释作用，但这种接口会存在液体死体积问题。 芯片CE与ESI-MS联用的方法主要分为两类: 一类是将ESI源和CE 微芯片整合在一起, 另一类是把毛细管喷雾器附加在CE 微芯片内。后者的应用更为广泛, 其优势在于更有利于装置的微型化。 * * 不适合 适合 生物大分子的分离 依据分配系数的差异 依据迁移速率的差异 组分分离 有扩散，存在传质阻力，柱效低 扩散小，不存在传质阻力，柱效高 组分分子的扩散 有压力流带动 电渗流和电泳流的共同作用 组分分子移动 层流，峰展宽大 平流，峰展宽小 流体流动形式 高效液相色谱 毛细管电泳