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注射用重组链激酶 Zhusheyong Chongzu Lianjimei Recombinant Streptokinase for Injection 本品系由高效表达链激酶基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后冻干制成。含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。 1基本要求 生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。 2制造 2.1工程菌菌种 2.1.1名称及来源 重组链激酶工程菌株系由带有链激酶基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。 2.1.2种子批的建立 应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。 2.1.3菌种检定 主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。 2.1.3.1划种LB琼脂平板 应呈典型大肠杆菌集落形态，无其他杂菌生长。 2.1.3.2染色镜检 应为典型的革兰阴性杆菌。 2.1.3.3对抗生素的抗性 应与原始菌种相符。 2.1.3.4电镜检查（工作种子批可免做） 应为典型大肠杆菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。 2.1.3.5生化反应 应符合大肠杆菌生物学性状。 2.1.3.6链激酶表达量 在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。 2.1.3.7质粒检查 该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。 2.1.3.8 目的基因核苷酸序列检查（工作种子批可免做） 目的基因核苷酸序列应与批准序列相符。 2.2原液 2.2.1种子液制备 将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养，供发酵罐接种用。 2.2.2发酵用培养基 采用适宜的不含任何抗生素的培养基。 2.2.3种子液接种及发酵培养 2.2.3.1在灭菌培养基中接种适量种子液。 2.2.3.2在适宜的温度下进行发酵，应根据经批准的发酵工艺进行，并确定相应的发酵条件，如温度、pH值、溶氧、补料、发酵时间等。发酵液应定期进行质粒丢失率检查（附录Ⅸ G）。 2.2.4发酵液处理 用适宜的方法收集处理菌体。 2.2.5初步纯化 采用经批准的纯化工艺进行初步纯化，使其纯度达到规定的要求。 2.2.6高度纯化 经初步纯化后，采用经批准的工艺进行高度纯化，使其达到3.1项要求，即为链激酶原液。加入适宜稳定剂除菌过滤后，保存于适宜温度，并规定其有效期。 2.2.7原液检定 按3.1项进行。 2.3半成品 2.3.1配制与除菌 2.3.1.1稀释液配制 按经批准的配方配制稀释液。配制后应立即用于稀释。 2.3.1.2稀释与除菌 将检定合格加稳定剂的链激酶原液用2.3.1.1项稀释液稀释至所需浓度。除菌过滤后即为半成品，保存于2～8℃。 2.3.2半成品检定 按3.2项进行。 2.4成品 2.4.1分批 应符合“生物制品分批规程”规定。 2.4.2分装及冻干 应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。 2.4.3规格 应为经批准的规格。 2.4.4包装 应符合“生物制品包装规程”规定。 3检定 3.1原液检定 3.1.1生物学活性 依法测定（附录Ⅹ I）。 3.1.2蛋白质含量 依法测定（附录Ⅵ B第二法）。 3.1.3比活性 为生物学活性与蛋白质含量之比，每1mg蛋白质应不低于9.00×104IU。 3.1.4纯度 3.1.4.1电泳法 依法测定（附录Ⅳ C）。用非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为10%，加样量应不低于10μg，用考马斯亮蓝R250染色。经扫描仪扫描，纯度应不低于95.0%。 3.1.4.2高效液相色谱法 依法测定（附录Ⅲ B）。色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以A相（三氟乙酸-水溶液：取1.0ml三氟乙酸加水至1000ml，充分混匀）、B相（三氟乙酸-乙腈溶液：取1.0ml三氟乙酸加入色谱纯乙腈至1000ml，充分混匀）为流动相，在室温条件下，进行梯度洗脱（0～70％B相）。上样量不低于10μg，于波长280nm处检测，以链激酶色谱峰计算理论板数应不低于2000。按面积归一化法计算。链激酶主峰面积应不低于总面积的95.0%。 3.1.5分子量 依法测定（附录Ⅳ C）。用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为10%，加样量应不低于1.0μg，制品的分子质量应为47.0kD±4.70kD。 3.1.6外源性DNA残留量 每1支次人用剂量应不高于10ng（附录Ⅸ B）。 3.1.7宿主菌蛋白残留量 应不高于总蛋白质的0.050%（附录Ⅸ C）。 3.1.8残余抗生素活性 依法测定（附录Ⅸ A），不应有残余氨苄西林或其他抗生素活性。 3.1.9细菌内毒素检查 每1mg蛋白质应小于3EU（附录Ⅻ E凝胶限量试验）。 3.1.10等电点 主区带应为4.6～5.6, 供试品的等电点与对照品的等电点图谱一致。（附录Ⅳ D）。 3.1.11紫外光谱扫描 用水或生理氯化钠溶液