第6沼肼 植物学课件.docVIP

第6章 植物的胚胎培养和离体授粉 第1节 胚胎培养 对无菌分离出的成熟胚或未成熟胚进行体外培养,以获得发育正常的植株的技术. 成熟胚:具有完整的胚芽、胚根、胚轴和子叶等. 未成熟胚:子叶形胚前各发育期的胚. 广义:胚培养还可包括胚珠和子房培养以及胚乳培养等 1 成熟胚培养 1.1 培养基 成熟胚在简单的培养基上就可培养，一般由大量元素的无机盐和蔗糖组成。 1.2 培养方法： 成熟种子 ? 表面消毒 ? 在超净台中解剖种子 ? 取出胚种植在培养基上 ? 在常规条件下培养 2 幼胚培养 幼胚在胚珠中是异养的，因此需要通过培养基提供各类营养和生物活性物质。 2.1幼胚的培养方法 取材 幼胚剥离 接种培养 2.2影响幼胚培养的因素 1)胚胎的发育时期 双子叶植物合子胚的发育过程: 原球胚、心形胚、鱼雷胚、 子叶形胚和成熟胚等4个阶段. (1）双子叶植物 一般心形期以后的双子叶胚比较容易培养 。胚龄越小越难培养。 (2）单子叶胚 一般受精后8d左右，长度在0.5mm以上的禾谷类胚在离体培养时较易成活。越小越难。 采用Monnier(1976,1978)建立的双培养基培养方法可培养50~60微米长的早期球形胚.? 2.2 培养基 比成熟胚要求高.常用Nitsch,MS,1/2MS等，禾谷类还常用N6，B5等. (1) 无机盐 : 成分较复杂，含多种微量元素。 (2) 碳水化合物: 蔗糖是多数植物最好的碳源,也有渗透调节作用. 蔗糖浓度一般高于成熟胚. (3) 维生素: 发育初期的幼胚必需加入某些维生素.常用:硫胺素、生物素等. (4) 氨基酸 ：对不同植物和不同发育时期的幼胚,各种氨基酸的效果不同. (5) 植物生长物质: 低浓度的生长素、赤霉素或激动素对某些植物幼胚生长有益处. 不同植物和不同发育阶段的幼胚要求不同。 (6) 天然附加物 ：幼胚培养基中常添加一些植物的胚乳. 2.3 培养条件 温度： 大多数植物胚胎培养的温度为25~30 0C,但不同植物要求不同。 光照： 幼胚培养初期一般在弱光或黑暗条件下培养。也因植物而异. pH： 不同植物和不同时期的幼胚对pH 的要求不同. 气体成分(二氧化碳;氧气等): 对幼胚培养也有影响。 2.4培养过程： 双子叶植物（球形胚晚期以及更大的荠菜胚）的培养： 消过毒的荠菜蒴果放在几滴无菌培养基中 ?用镊子将蒴果外壁的两半撑开，露出胚珠 ?解剖镜下可见胚珠中绿色的鱼雷形或更幼龄胚 ?由胎座上取下一个胚珠，放在凹玻片中（内有一滴培养基） ?用锋利的有柄刀片将胚珠纵切成两半 ?留下有胚的一半，仔细剔除胚珠组织 ?取出联着胚柄的完整胚 (较老胚在胚珠上无胚的一侧切一小口，用钝头解剖针轻压珠被?把完整的胚挤出到周围的液体中) ?接种到Monnier(1976)培养基上 ?幼胚发育到鱼雷形阶段 ?转移到降低了蔗糖浓度（2~3%）的同样培养基上 ?发育成熟?植株 3 植物胚胎培养的应用 3.1 远源杂交中克服杂种不育（胚胎拯救） 挽救杂种胚以产生稀有杂种. 如：普通大麦和球茎大麦；柑橘类合子胚培养等。 3.2促进无生活力或生活力低下的种子萌发 如:野生食用芭蕉（M. balbisiana）;早熟桃和樱桃;椰子(Makapuno)等. 3.3 缩短育种周期 克服种子休眠；生活力快速鉴定； GA 3.4单倍体的产生 如大麦?球茎大麦；小麦?玉米：胚胎发育早期父本染色体被排除，形成单倍体胚，生长相当缓慢。 必须把胚剥离出来进行培养，才能得到单倍体植株。 3.5 植物种质保存 幼胚具备超低温保存要求细胞原生质浓、无液泡化、细胞壁较薄等有利条件,因此用幼胚进行超低温种质保存效果较好. 3.6 理论研究 第2节 胚珠和子房培养 1 胚珠培养 (ovule culture) 包括授粉和未授粉胚珠的培养 1)培养方法: 授粉时间合适的子房 ?表面消毒 ?无菌剥出胚珠（一般带胎座） ?培养 2) 培养基 应用较多的有MS、White, Nitsch N6等. 根据胚珠发育时期的不同、是否带胎座及不同植物种类,需要加不同的植物生长物质。 有的还要再加一些天然提取物.蔗糖浓度5%左右。 3) 影响胚珠培养的因素 (1) 发育时期 球形胚或更后期的胚珠,较易培养；培养基较简单. (2) 有机成分 培养基中添加胚乳往往有利