第二篇 一般组织化学技术.pptVIP

标本制备技术: 组织化学的基本要求： 保持组织细胞良好的形态结构。 具备高度的特异性。 应有一定的灵敏性。 4. 可重复性。 5. 生物反映的产物必须在原位沉淀、色深、不溶和具有稳定性的特点。 组织切片技术:（一）冰冻切片： 速冻： 干冰—丙酮（酒精）法： 液氮法： 2. 蔗糖浸泡法： （二）石蜡切片：是经典而最常用的 技术。 步骤：共5大步骤： ①取材→ → ②固定→ → ③脱水→ → ④浸蜡、包埋→ → ⑤切片玻片处理和涂胶：  （三）振动切片： （四）塑料切片： （五）超薄切片：用于电镜组织化 学。 （六）碳蜡切片： 三、准备阶段： 1. 试剂、药品: 2. 动物: 3. 实验（模型）: 4. 标本制备（备用）: 四、组织化学反应： 五、观察、记录及结果统计分析： 六、查文献写论文： 1.多糖： 2. 粘液物质： 3. 糖蛋白： 4. 粘液脂类： （二）显示方法： PAS反应：过碘酸雪夫（Schiff） 氏法。 反应产物呈紫色沉淀。 在反应中，特别注意PH和温度。 此外HI04还能氧化其它基团： α-氨基醛、酮类、丝氨酸、 α-氨 基醇等。 三、核酸组织化学技术 （一）概述： （二）显示方法： 1. 福尔根（Feulgen）显示DNA法： 2. 其它方法自学。 四、蛋白质组织化学 五、荧光组织化学 （一）概述： （二）分类： 1. 自发荧光： 2. 诱发荧光： （1）甲醛诱发生物胺荧光反应： （2）乙醛酸诱发生物胺荧光反应： （3） 邻苯二醛诱发组织胺荧光： 3. 荧光染色： Fura-2/3: 4.免疫荧光：（见6.3） 5.酶促荧光： （三）、荧光显微镜的使用 荧光显微镜的组成： （1）光源：200W高压汞灯。 （2）滤色系统： ①激发滤板： 　紫外光激发滤板：400nm以下 紫外蓝光激发滤板：300~450nm 紫蓝光激发滤板：350~490nm 　②压制滤板： 紫外光压制滤板： 紫蓝光压制滤板： 紫外紫光压制滤板： （3）反光镜： （4）聚光镜： （5）物镜： （6）目镜： （7）落射光装置： 2. 荧光显微镜标本制作要求： 3. 荧光显微镜使用的注意事项： 4. 荧光图象的记录方法： （1）描述法： （2）荧光照相： （3）暴光时间测定法： （4）强弱表示法： （5）显微荧光测定法： * 组织化学的基本程序 一、选题： 确定研究对象（内容）。 依据前期研究和文献资料。 二、选方法：原则： 应尽量简单， 特异性和灵敏度高， 易得结果， 结果可靠性强。 一般组织化学技术 一、酶组织化学 （一）基本概念及分类特点： ① 酶蛋白是大分子，而一般催化剂 为小分子。 ② 酶具有高效的催化能力，其催化 效能比一般催化剂高很多倍。　　 ③ 酶催化反应条件温和，近中性和常温下即可发生酶催化反应。 ④ 酶对催化的底物具有高度的专一性。 ⑤ 酶分子结构多种多样，其活性受体 内多种因素的调控 分为六类： a. 氧化还原酶类： b. 转移酶类： c. 水解酶类： d. 裂合酶类： e. 异构酶类： f. 合成酶类: （二） 酶的保存及影响酶催化反应 的因素 1.酶浓度的影响： 2.底物浓度的影响： 3.激活剂浓度的影响： 抑制剂的影响： 根据抑制剂对酶的抑制作用不同： 不可逆性抑制： 可逆性抑制： 竞争性抑制： 非竞争性抑制： 反竞争性抑制： 5. PH值对反应的影响： 最适PH值常表现于三个方面：  一是对Vmacr反应速度的影响。 二是对Km或对底物与酶的亲 和性的影响。 三是对酶稳定性的影响。 确定最适PH的方法： 一是查阅文献，根据前人的经验， 预实验印证（碱性磷酸酶9.2，酸 性磷酸酶5.0）。 二是实验测定最适PH值。 6. 温