第三代慢病毒包装系统优化和Rev表达质粒对慢病毒包装效率作用初探_阮峥.pdfVIP

生 物 技 术 通 讯 770 LETTERSINBIOTECHNOLOGY Vol.25No.6 Nov.,2014 doi:10.3969/j.issn.1009-0002.2014.06.004 研究报告 第三代慢病毒包装系统优化及Rev表达质粒对慢病毒包装 效率作用初探 阮峥，王文天，杨洋，段永娟，胡晓 中国医学科学院、北京协和医学院 血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室，天津 300020 ［摘要］ 目的：对目前最为常用的三质粒慢病毒包装系统进行优化，以期明确各质粒表达的病毒成分对提高慢病毒 包装效率的重要性。方法：在限定总质粒量为10 μg的情况下，将表达绿色荧光蛋白（GFP）的目的质粒、表达gag/ pol、Rev、VSVG的包装质粒按不同比例混合，转染293T细胞进行病毒包装，48 h后收集上清用于感染293T及K562细 胞，72 h后经流式细胞术检测GFP+ 阳性细胞比例，分析所获病毒的感染效率。结果：采用不同的质粒混合比例包装 的病毒感染效率具有明显差异，其中携带GFP的目的质粒量影响作用最为显著，当目的质粒量从15%（1.5 μg）增至 35%（3.5 μg）时，GFP+ 293T细胞比例从14.2%升至45.1%,增加了3.2倍。当固定目的质粒量为35%，同时分别将表 达gag/pol或Rev的质粒量从15%提高到25%时，改变Rev组的GFP+阳性率提升最明显，为1.5倍；而改变VSVG质粒量 在已测试的混合比例中作用不显著。包装病毒感染K562细胞的结果与293T细胞类似。结论：通过对比包装病毒的 感染效率，优化了慢病毒包装的混合质粒条件，并成功地应用于感染白血病细胞系；首次发现提高Rev质粒量可以更 有效地提高病毒的包装效率，为利用慢病毒表达体系研究多种基因在血液系统中的功能奠定了技术基础。 ［关键词］慢病毒表达体系；包装质粒；Rev ［中图分类号］Q78 ［文献标识码］A ［文章编号］ 1009-0002（2014）06-0770-05 Optimization of the HIV-1 Based Three Plasmids Lentivirural Pack⁃ aging System and Investigation of the Importance of Rev Expression Plasmid RUAN Zheng, WANG Wen-Tian, YANG Yang, DUAN Yong-Juan, HU Xiao* State Key Laboratory of Experimental Hematology, Institute of Hematology and Blood Disease Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Tianjin 30020, China *Corresponding author, E-mail: xiaohu@ ［Abstract］ Objective: In order to produce a high-tier viral particles, this study has optimized the ratio of lenti⁃ viral packaging plasmids used for the third generation HIV-1 based lentivector expression system. Methods: The HIV-1 based expression lentivector, pHEGP（contains the GFP fluorescence gene）, was mixed with the other three packaging plasmids, expressing gag/pol, Rev and VSVG respectively, in different ratios. A fixed amount of 10