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实验九 蛋白质及氨基酸的呈色反应 一 实验目的 本文档由【中文word文档库】提供，转载分发敬请保留本信息； 中文word文档库免费提供海量范文、教育、学习、政策、报告和经济类word文档。 1 了解构成蛋白质的基本结构单位及主要联接方式。 2 了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。 3 学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。 二 呈色反应 双缩脲反应： 实验原理 尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并释放出一分子案。双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色的化合物，此反应成为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。 操作方法 取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后，加10%NaOH 1ml，振荡混匀，再加1%CuSO4溶液一滴，在振荡。观察出现的粉红颜色。避免加过量CuSO4，否则生成的蓝色氢氧化铜掩盖粉红色。 取另一支试管加卵清蛋白溶液1ml 和10%NaOH溶液2ml，摇匀，再加% CuSO42滴，随加随摇试管，观察紫玫瑰色的出现。 黄色反应 实验原理 含有苯环结构的氨基酸，遇硝酸后可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成深橙色的硝醌酸钠。多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以才有黄色反应，苯丙氨酸不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。 操作方法 取7支试管，按下表加入试剂 管号 材料（滴） 浓硝酸（滴） 现象 1 鸡蛋清溶液 4 2 2 大豆提取液 4 4 3 指甲 少许 40 4 头发 少许 40 5 0.5%苯酚 4 4 6 0.3%色氨酸 4 4 7 0.3%酪氨酸 4 4 坂口反应 实验原理 精氨酸和许多胍代化合物与a-萘酚在碱性次溴酸钠溶液中发生反应，产生红色物质。 2操作方法 向各试管中按下表加入试剂，记录出现的现象。 管号 试剂 （滴） 1 2 3 蒸馏水 / 4 5 0.3%精氨酸 / 1 / 蛋白质溶液 5 / / 20%NaOH 5 5 5 a-萘酚 3 3 3 NaBrO 1 1 1 现 象 本实验十分灵敏。a-萘酚要过量。次溴酸钠、精氨酸即蛋白质均不可过多，过多的次溴酸钠可继续氧化有色产物使颜色消失。 乙醛酸反应 1实验原理 在浓硫酸存在下，色氨酸与乙醛酸反应生成紫色物质，反映机理尚不清楚，可能是一分子乙醛酸与两分子色氨酸脱水缩合形成与靛蓝相似的物质。 2 操作方法 取三支试管，按下表加入试剂。 管号 试剂 1 2 3 蒸馏水(滴) / 4 5 0.03%色氨酸溶液（滴） / 1 / 蛋白质溶液（滴） 5 / / 冰醋酸（ml） 2 2 2 混匀后，试管稍倾斜，沿管壁缓慢加入。 浓硫酸（ml） 1 1 1 现 象 假如浓硫酸后静止，观察各管液面间紫色环的出现。若不明显，可在水浴中微热。 偶氮反应 实验原理 偶氮化合物与酚核或咪唑环结合产生有色物质。它与酪氨酸和组氨酸反应的产物分别为红色和樱桃红色。 操作方法 取3支试管，按下表加入试剂并观察有色产物的生成。 管号 试剂（滴） 1 2 3 0.3%组氨酸溶液 4 / / 0.3%酪蛋白溶液 / 4 / 鸡蛋清 / / 4 重氮试剂 8 8 8 20%NaOH溶液 2 2 2 现 象 (六)醋酸铅反应及亚硝基铁氰化钠反应 实验原理 蛋白质分子中常含有半胱氨酸和胱氨酸，含硫蛋白质在强碱条件下，可分解形成硫化钠。硫化钠与醋酸铅反应生成黑色的硫化铅沉淀。若加入浓盐酸，就生成有臭味的硫化氢气体。 操作方法 向试管中加入0.5%醋酸铅溶液1ml，再加10%NaOH溶液之产生的沉淀完全溶解为止。要云，加入被水稀释一倍的鸡蛋清0.4ml混匀，小心加热，至溶液变黑后，加入浓盐酸数滴，嗅其味，并将湿润醋酸铅试纸置于管口，观察其颜色的变化。 将一滴0.3%半胱氨酸溶液滴在白磁盘的凹穴中，加10%NaOH3滴，再滴一滴5%亚硝基铁氰化钠溶液，观察玫瑰红颜色的生成（此颜色不稳定，很快消失）。 三 试剂和器材 试 剂 1 尿素 2 NaOH 3 CuSO4 4 卵清蛋白溶液 5 鸡蛋清溶液 6 大豆提取液 7 头发