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卷烟清除自由基的天然添加剂的筛选及其效果评价 　　摘要：研究了用于卷烟滤嘴的天然抗氧化剂活性的评价方法，同时验证了多酚类、黄酮类等天然抗氧化剂去除自由基的能力。研究结果表明：确定的适合于在实验室进行的对抗氧化剂的评价方法：HPLC法，考虑抗氧化剂的性能。分析得到的适于直接添加到卷烟滤嘴中的天然抗氧化剂：TP98%、TP35%、SIF40%、SIF20%、GSH。这5种抗氧化剂在去除稳定的自由基DPPH时都有较好的效果。以水：油=93：7（质量比）的比例添加天然抗氧化剂，对油剂的乳化没有影响。对样品水溶液分析了温度对其去除率的影响 关键词：天然抗氧化剂；DPPH；HPLC；自由基 中图分类号：Q562 文献标识码：A 文章编号：1674-9944（2016）06-0190-04 1 课题主要任务和目标 研究目标为研究评价天然植物提取物抗氧化性的方法；根据评价结果筛选出合适的天然植物提取物抗氧化剂 研究内容为查找文献总结出抗氧化剂的评价方法，并从中选择出适用于在实验室进行实验的方法；抗氧化剂的评价方法主要有：DPPH自由基清除法、FRAP法、β-胡萝卜索-亚油酸乳化液氧化法、硫代巴比妥酸反应物（TBARS）值法等多种方法，综合考虑这几种方法，选择出适于在实验室进行实验的方法。用所选的方法对茶黄素20%、茶多酚98%、茶多酚80%、茶多酚35%、大豆异黄酮40%、大豆异黄酮20%、红茶40%、番茄红索10%等抗氧化剂进行综合评价。观察抗氧化剂在油剂中的稳定性，评价温度对抗氧化剂活性的影响 2 材料与方法 2.1 实验材料 主要仪器选用自动进样高效液相色谱仪1100型，美国Agileht公司；电子天平，上海精密科学仪器有限公司 主要试剂选用无水乙醇（分析纯）；甲醇（分析纯）；茶黄素TF20%；茶多酚TP98%；茶多酚TP80%；茶多酚TP35%；大豆异黄酮SIF40%；大豆异黄酮SIF20%；红茶BTE40%；番茄红素LYC10%；谷胱甘肽GSH；ST-90油剂，南通醋酸纤维有限公司提供 2.2 测定方法 DPPH自由基清除法是使用较广泛的一种抗氧化剂的评价方法，由于清除剂直接作用于DPPH20min左右，操作简单，且用一般的分光光度计即可测定，因此DPPH接、灵敏、快速、简便。而其他3种方法如：FRAP法、β-胡萝卜素-亚油酸乳化液氧化法、硫代巴比妥酸反应物（TBARS）值法，也可用于评价抗氧化剂的效果，但是FRAP法一般用于非酶抗氧化剂，而且其TPTZ工作液的制备和反应温度要求较高；β-胡萝卜素-亚油酸乳化液氧化法其实验过程比较复杂，β-胡萝卜素-亚油酸乳化液的制备过程也很复杂；硫代巴比妥酸反应物（TBARS）值法，需要放入生物培养箱中，40±1℃下培养，96h后取出再经过一系列处理才可进行评价，所需时间较长。综合考虑以上4种方法，得出在实验室中进行的最适方法为：DPPH自由基清除法 选取了现在市场上较主流的天然植物抗氧化剂包括绿茶提取物（茶多酚TP98、TP80和TP35）和红茶提取物（茶黄素）、大豆异黄酮、番茄红素以及本实验室通过微生物发酵提取得到的谷胱甘肽为比较对象，以1，1-联苯-β-苦基偕腙肼（DPPH）为标准自由基，通过分光光度法和HPLC方法评价各类天然抗氧化剂体外清除自由基的能力，对其作为卷烟去自由基添加剂作初步的筛选 2.2.1 HPLC法 用DPPH比色法评价抗氧化剂的自由基清除能力具有一些不足之处，比如无法正确评价某些药物的抗氧化性，因为易受样品中一些色素的干扰。现在发展出一种简单、灵敏的HPLC化验方法用于评价草药的抗氧化能力。这种HPLC方法专用于DPPH，具有重复性好，可避免各种物质的吸光度的叠加，检测时间短的优点，适合于快速检测多个样品的自由基清除能力 （1）HPLC实验参数。本实验中采用HPLC体系中最常用的反相色谱柱Hypersil ODS（4.6mm×200mm，4.6μm），使用甲醇/水（80/20，v/v）为流动相，实验温度25℃，以20“L进样，在波长517nm出检测DPPH出峰。在空白溶液与样品溶液之间DPPH峰面积（PA）的减少量被用来评价样品的清除率。（1） （2）DPPH标准曲线的绘制。准确称取DPPH样品0.01g，用甲醇溶液定容至10mL，浓度1g/L，作为储备液，并将该溶液记作A溶液，甲醇溶液记作B溶液，去离子水溶液记作C溶液，梯度稀释情况如表1 以不同浓度标准溶液的主峰面积对其浓度作图得到面积一浓度标准曲线图1 （3）样品水溶液的清除效果。准确称取各样品0.01g，用去离子水定容至50mL，浓度0.2g/L，浸提2～3h，过滤后将该溶液记作A溶液；准确称取DPPH0.01g，用甲醇溶液定