多重壁碳纳米管复合载体上固定方法的比较及粒子尺寸效应.pdfVIP

第27卷 第 7期 应 用 化 学 Vol|27No．7 2010年7月 CHINESEJ0URNAL0FAPPLIED CHEMISTRY July2010 漆酶在纳米金溶胶 ／多重壁碳纳米管复合载体上 固定方法的比较及粒子尺寸效应 曾 涵 尹筱莉 杨忠丽 徐江玲 张永全 (新疆师范大学化学化工学院 乌鲁木齐 830054) 摘 要 以纳米金溶胶 (NGS)和多重壁碳纳米管(MWCNTs)的共混物 (NGS／MWCNTs)作为固定漆酶的载 体 ，研究了3种固定漆酶方法在酶固定量、比活力上的差异。研究 了不同的固定方法对 固定酶热稳定性和重 复使用性及纳米金溶胶颗粒粒径对酶固定量和固定酶动力学参数的影响。实验结果表明，NGS／MWCNTs具 有良好的固定漆酶能力和高固酶比活力 ，NGS／MWCNTs(NGS粒径37nm)通过简单物理吸附法固定漆酶的量 和固酶的比活力最高，分别可达33．80mg／g和9．433U／mg。在NGS／MWCNTs上采用化学键合方法固定的漆 酶在70℃放置2h后仍然保持初始活力的75％，重复使用2O次后仍保持初始活力的70％。纳米金溶胶粒子 越小(24nm)，底物和固定漆酶间亲和力越好(KM=0．027mmol／L)，表观速率常数越大。 关键词 漆酶，酶固定，纳米金溶胶，粒子尺寸效应，热稳定性，重复使用性 中图分类号：0629．8 文献标识码：A 文章编号：1000-0518(2010)07-0829-07 D0I：10．3724／SP．J．1095．2010．90433 漆酶(Laccase，E．C．1．10．3．2)是一类含铜的多酚氧化酶 ¨J，可催化许多芳香化合物的单电子氧化 反应，同时催化O还原生成水 J。近年来在生物传感器、生物燃料 电池及废水处理等领域均有漆酶应 用的报道 。游离漆酶催化活性受外界因素影响极大，易失活，因此采用一定载体 以合适方式固定酶 被认为是提高漆酶稳定性的有效方法 6j。目前，酶固定方法有包埋法 J、结合法 、吸附法 及交联 法 j，固酶方法的选择取决于载体性质、酶的种类、成本、使用 目的和过程的复杂程度 ¨。。。见于文献报 道的酶固定载体有：无机溶胶-凝胶体系 、聚合物 、多孔玻璃_】、多孔硅土 等。它们被选择的原 因在于其拥有较高的比表面积、表面多孔结构及化学、力学性能稳定 J。纳米金材料独特的纳米微结 构和 良好的导电性能，使其在电化学传感器研究领域具有潜在应用价值 。Huang等 报道了利用纳 米多孔金材料固定漆酶，但仍存在使用Au量过多、固酶率低、重复使用性能及热稳定性欠佳的缺陷。碳 纳米管具有较高的比表面积、优 良的导电性能以及 良好的生物相容性，近年来有文献 ¨报道了其在固 定氧化还原酶及促进酶一电极间电子直接迁移的应用。但碳纳米管在溶剂中容易团聚，与蛋 白质分子之 间相互作用也会在一定程度上降低固酶量和固酶比活力。 本文采用纳米金溶胶 (NGS)／多重壁碳纳米管(MWCNTs)复合物作为固定漆酶的载体，以实现2种 载体固定漆酶的协同作用，既避免了碳纳米管易团聚导致的固酶量下降，又避免了纳米金溶胶固酶后难 与溶液分离导致难以研究固定漆酶性质的缺陷。本文以3种不同方法固定漆酶，并比较了各 自的固酶 量、比活力。在此基础上研究了不同方法对固酶的热稳定性、重复使用性能的影响及纳米金溶胶的粒子 尺寸对酶动力学参数的影响。本文采用的固酶复合载体制备简单，其载酶量和固酶比活力均高于NGS 和MWCNTs单独使用的载酶量和固酶比活力，热稳定性和重复使用性能均优于单独使用的NGS和 MWCNTs，在废水处理、生物燃料电池和电化学传感器开发等领域中有潜在的应用价值。 1 实验部分 1．1 试剂和仪器 牛血清白蛋 白(BSA，进 口分袋，武汉生物科技公司)；N一乙基一J7、r．(3一二 甲基氨丙基)碳二亚胺 (EDC)和J7v-羟基丁二酰亚胺 (NHS)购 自阿拉丁试剂公司；云芝漆酶(分子量68000，已纯化，现买现用， 2009-06-30收稿，2009—10-19修回 通讯联系人：曾涵，男，硕士，讲师；E—mail：zengha