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生物化学水杨酸比色定糖法
* * 实验一 3,5—二硝基水杨酸比色定糖法 目的和要求 1.掌握3,5—二硝基水杨酸比色法定糖的原理及方法。 2.用3,5—二硝基水杨酸定糖法测定样品中的总糖及还原糖。 实验原理 3,5----二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈现比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。 该方法是半微量测糖法，操作简便，快速，杂质干扰较小。 实验步骤 一、葡萄糖标准曲线的绘制 取9支大试管，分别按下表顺序加入各种试剂： 将上述各管溶液混匀后，用721型分光光度计（520nm）进行比色测定，用空白管溶液调零点，记录光密度值。以葡萄糖浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘制出标准曲线。 二、样品中总糖和还原糖含量的测定 1.样品中还原糖的提取：准确称取1g样品，放入50或100ml烧杯内，加入85％乙醇30ml，混匀，在50℃恒温水浴中保温30min，过滤，滤渣再用85％乙醇提取二次。将滤液合并，蒸去乙醇，加少量水，移入50ml容量瓶中，用水定容，备用。 2.样品中总糖的水解及提取：准确称取样品1g，放入大试管中，加入1ml 6mol/L盐酸和15ml蒸馏水。混匀，在沸水浴中加热半小时后，用碘化钾－碘溶液检查水解程度，若已水解完全，则不呈现蓝色。冷却后加入酚酞指示剂1滴。以10％氢氧化钠中和至溶液呈微红色。过滤并定容至100ml。再精确吸取上述溶液10ml，放入100ml容量瓶中，定容，备用。 3.样品中含糖量的测定：取7支大试管，分别按下表加入各种试剂： * *
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