RPLC层析管柱移动相的转换与平衡.PDF

RPLC層析管柱移動相的轉換與平衡 2 舉分析型層析管柱4.6 x 250mm ，其內容積計算式V = πr L 。經計算而得分析型4.6 x 250mm層析管柱之內容積為 4.2ml 。 1.)當選用分析型 C18 ( ODS ) 4.6 x 250mm層析管柱準備分析，儀器係統換上新的 MeOH / H2O, AeCN / H2O … 等不具酸，鹽類移動相時，約須10倍該層析管柱內容量 -即 10 x 4.2 約42ml的流通量，用以作成換新移動相及徹底完成新移動相的平衡，準備 為隨後HPLC可靠的定性定量分析。 2.) 若換新有機相 / (H2O 酸 + ) 移動相時，約須 15倍該層析管柱內容量即 15 x 4.2 約 60ml作為移動相轉換及平衡新移動相的流通量。 3.) 若換新有機相 / (H2O +酸 + 鹽類) 移動相時，約須 20倍該層析管柱內容量即 20 x 4.2 約 80ml 作為移動相轉換及平衡新移動相的流通量。若是調和“離子隅對試劑” Ion Pairing Reagent ，可能須要多些流通量，才能符合完整移動相轉換與新移動相平衡的需 求。 當換上新的移動相擬進行分析工作 ，若未能耐心 等候層析管完成轉相及所須“ 徹底 平衡 需求” ，即試作注入分析，將會體驗到以下的情況: 1.) 基線上下任移漂動，或逐漸規則性上揚或下移 2.) 注入分析觀查到滯留時間(RT)規則性往前縮移，或往後延遲 3.)所得圖峰，難有 Area, Height的再現性 只要層析管柱被徹底轉相 成為新的移動相，既可進行 LC可靠的分析 。 試舉 Emedastine Difumarate 準備進行分析移動相平衡與轉換作法參考: 層析管柱 Inertsil 5 C8-4 4.6x150mm 之最終保存液為 70 / 30 = AeCN / H2O 。分析用移動 相為 17 / 83 = AeCN / Phosphate Buffer (PPB) 。該 Inertsil 5 C8-4 4.6x150mm 先以移動 相 17 / 83 = AeCN / PPB 流通約30 分鐘，即流通約30ml移動相，接著設定 Run Time:15 分鐘的20個樣品分析程式。注入分析的第一針至第五針，由於分析移動相只有 17%低 AeC仍然在逐漸稀釋原高 70%AeCN的轉換平衡中，溶洗 Emedastine Difumarate 逐降， 因此 RT 逐漸規律性延後。直到第六針之後的分析，移動相 完成轉換才是 Emedastine Difumarate 安全可靠的分析數據，請參考如下圖示。