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微生物的形态观察与培养技术 ——产淀粉酶细菌的分离培养和观察 实验一 选择性培养基的制备目的要求1.明确培养基的配制原理；2.通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤；3.了解高压蒸汽灭菌的基本原理以及应用范围；4.学习高压蒸汽灭菌的操作方法。二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基的一种应用最广泛和最普通的细菌基本培养基，有时又称普通培养基，基础培养基含有牛肉膏，蛋白胨和NCl，其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂多用于培养基细菌，因此要用稀酸和稀碱将其pH调至中性微碱性，以利于细菌的生长繁殖。高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密封的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧的将冷空气从排气中驱除尽 ，然后关闭排气，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100°C的温度 ，导致菌体蛋白凝固变性而达到灭菌的目的。器材.试剂牛肉膏蛋白胨NaCl，琼脂1mol/L NaOH ，1mol/L HCl。 3.仪器试管三角烧杯量玻棒天平牛角匙pH试纸麻绳培养皿手提式高压蒸汽灭菌锅等四、操作步骤1.无菌器材准备：每组准备12套培养皿，6支1ml移液管，2个刮刀用报纸包扎，150~170℃条件下干热灭菌2h。1~4组配制试管斜面培养基，准备试管0支，共配00ml培养基分装。5~8组配置平板固体培养基，准备三角瓶8个，瓶内加入琼脂（按200ml培养基计算），共配制1600ml培养基进行分装。 1 称量按培养基配方比例依次准确称取牛肉膏，蛋白胨， NaCl放入烧杯中，牛肉膏用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿称量，用热水溶化后倒入烧杯 ，也可放称量纸上，称量后直接放入水中，稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片2.2 溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃摇匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，或在磁力搅拌溶解。将药品完成溶解后，补充水到所需总体积3 调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6反之，用1mol/L HCl进行调节分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或者三角烧瓶内加塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好用记号笔注明培养基名称组别配制日期三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用容易解开，同样用记号笔注明培养基名称，组别，配制日期灭菌将将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜，放回内层锅，并装入培养基，加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内，加热，0.103MPa，121°C并同时打开排气，使水沸腾以排除锅内的冷空气，待冷空气完全排尽后，关排气，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升；当锅内压力升到所需压力时，维持压力至所需时间。20min后，切断电源或者关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0”时，打开排气，开盖取出。9 倒平板、搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷至50°C左右，将试管口端搁置在玻棒或其它合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的为宜编号??? 取无菌平皿套，分别用记号笔表明10-4、10-5、10-6（稀释度）各套。另取只盛有4.5ml无菌水的试管，依次是10-3、10-4、10-5、10-6。稀释??? 用1ml无菌吸管吸取1ml已充分混匀的悬液，精确地放0.5ml至10的试管中，此即为10倍稀释。将多余的菌液放回原菌液中。将10试管置试管震荡器上震荡，使菌液充分混匀。另取一只1ml吸管插入10试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。用此吸管吸取0.5ml至10试管中，其余以此类推。取样??? 用三支1ml无菌吸管分别吸取10-4、10-5和10-6的稀释菌悬液各0.2ml，对号放入编号好的无菌平皿中。°C倒置培养24~72h。微生物的形态观察与培养技术 ——产淀粉酶细菌的分离培养和观察 实验二 产淀粉酶细菌的鉴别与形态观察 一、目的要求 1.掌握从样品中分离和鉴别淀粉酶产生菌的方法。 2.复习微生物形态观察方法。 二、实验原理 淀粉酶能使培养基中的淀粉分解为葡萄糖，而淀粉与碘液可发生反应形成蓝色化合物，而葡萄糖、蔗糖等则不会出现显色反应，结果可使淀粉酶产生菌周围出现透明圈，圈外为蓝色显色区域，以此筛选出淀粉酶产生菌。 三、实验器