新型土壤总RNA快速提取试剂盒.doc-深圳市中联生物科技开发有限公司.doc

深圳市中联生物科技开发有限公司 ZL Biotech Corporation 地 址：深圳市南山区桃源街道留仙大道1183号南山云谷创新产业园综合服务楼506-508 电 话：0755传真：0755-8655 0193 网 址：  一般实验室使用，仅用于体外 新型土壤总RNA快速提取试剂盒 用于各种土壤微生物总RNA提取 目录号：RP7001（50次） RP7002（100次） 使用手册 2009年6月，第3版 深圳市中联生物科技开发有限公司 ZL Biotech Corporation 六、疑难解答 出现的问题 可能的原因 建议解决方法 RNA产量低 样品裂解不彻底。 液氮研磨的时候尽量研磨完全， 加入裂解液后剧烈震荡或者用枪 头吹打帮助裂解。 使用的样品或者裂解物在 存放时间过长可能降低 RNA 产 -20℃或者-70℃存放太 量，应尽快的处理样品或者裂解 久。 物。 本身含 RNA 少。 不同类型的土壤含有不同量的 RNA，对于含量少的样本应该适 当提高起始处理量。 电泳或回收过程中降解 电泳槽处理；操作过程尽量避免 外源 RNase 降解。 OD260 /OD280 吸光度比值 分光光度计检测吸光度 检测时用 TE 稀释样品。 1.6 时，RNA样品不是溶于TE， 而是溶于水。低离子浓度 和低pH条件下，OD280 值会 较高，造成比值偏低。 -5- 一、试剂盒组成、储存、稳定性 试剂盒组成 保存 50 次（RP7001） 100 次（RP7002） 裂解液 SLS 室温 55ml 110ml 溶液 SS1 室温 6ml 12ml 溶液 SS2 室温 16ml 32ml 溶液 SS3 室温 16ml 32ml 70%乙醇 室温 22.5ml RNase-free H2O 45ml RNase-free H2O 第一次使用前按说明加指定量乙醇 RNase-free H2O 室温 5 ml 10ml 本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。 二、原理简介 独特裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，通过独特的腐殖酸沉淀 剂去除腐殖酸，酚氯仿抽提去除杂质及蛋白，最终 RNA 被异丙醇沉淀下来 三、试剂盒特点 1． 本试剂盒操作简单，时间短，极大的避免 RNA 的降解。 2． 兼容性强，适用于各种不同的土壤样本。 3． 独特的腐殖酸沉淀试剂，避免其对下游产生影响。 4． 不需要特殊的震荡器，方便客户的使用。 5． 本试剂盒操作过程中已经尽量去除 DNA，一般无需再用 DNA 酶消 化 -2-  四、注意事项（实验前必须首先阅读这部分！） 1． 在抽提RNA过程中任一环节的不正确操作都可能导致RNA酶的污染。由于RNA 酶的活性很难完全抑制，预防其污染是十分必要的，可以选用RNase喷雾清除 剂去除RNase（RP6001）。在实际的操作中应遵循以下指南： 全程佩戴手套。皮肤经常带有细菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成为 RNA酶的来源。培养良好的微生物实验操作习惯预防微生物污染。 使用灭菌的，一次性的塑料器皿和自动吸管抽提RNA，避免使用公共仪 器所导致的RNA酶交叉污染。例如，使用RNA探针的实验室可能用RNA 酶A或T1来降低滤纸上的背景，因而某些非一次性的物品（如自动吸管） 可能富含RNA酶。 在裂解液中，RNA是隔离在RNA酶污染之外的。而对样品的后续操作会 要求用无RNA酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。玻璃器皿可以在 150°C的烘箱中烘烤4小时。塑料器皿可以在0.5 M NaOH中浸泡10分钟， 用水彻底漂洗干净后高压灭菌备用。 2． 有些离心步骤需在4℃完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机， 如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 3． 试剂含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。 若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 4． 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应 及时盖紧盖子。 5． 需自备水饱和酚(酸性酚)﹕氯仿﹕异戊醇 （25:24:1，pH6.5-8.0）、异丙醇、无 水乙醇、2ml RNase-free 离心管。 五、操作步骤 取 0.5g 土壤样本，用液氮研磨成