植物分子育种实验.doc-东北农业大学植物科学与技术试验教学中心.doc

东北农业大学本科实验课程教学大纲 实验课名称：植物分子育种 实验课英文名称：Plant Molecular Breeding 一、实验课程课号： 适用专业：种子科学与工程 理论课程总学时：32 实验总学时（周学时）：16（4） 学分：0.5 开出实验个数：（验证实验 3 个；综合实验 1 个） 应开实验学期：第6学期 二、实验课程简介 植物分子育种实验是理论课《植物分子育种》的实践基础，是按照全国高等农业院校教材的要求所设。本实验课所开设的内容均是配合《植物分子育种教学大纲》的理论课程安排，包括基本药品的配制，仪器的使用，PCR扩增，质粒的酶切与连接，植物遗传转化等。要求学生通过本课程的学习，掌握植物分子育种的基本操作技术，具有独立完成科研课题的能力。教材为陈宏基因工程实验技术(面向21世纪课程教材) 中国农业出版社生物工程技术实验指导高等教育出版社2004）。 三、实验教学目标及基本要求 实验教学目标 (1)主要是配合理论教学，使学生更好地理解和掌握理论教学中所讲授的基本概念、原理和应用(2)给学生提供实践操作的机会，锻炼并提高学生的科研动手能力。 (3)通过实验培养学生独立思考和解决问题的能力，且训练学生综合设计实验的能力。 (4)通过《实验》课程的学习，帮助学生在实践中更好地了解基础理论与技能如PCR扩增技术DNA片段回收与连接等。 基本要求 (1)预习实验指导书及有关教材，了解该实验原理、内容和方法。 (2)实验时必须细心、严肃认真。 (3)节省药品、爱护仪器、如有损坏必须登记。 (4)实验应独立思考，认真操作。 (5)有些药品对人体有腐蚀性，一律以毒品看待。因此，必须严防毒品经口或经皮肤进入体内，未经允许不准任意将药品携带出实验室外，实验的废弃物，一律倒入指定缸内，不能随便乱丢。 (6)按时完成作业、认真统计并分析实验结果。 (7)实验完毕应将用具洗净并放回原处。 陈宏基因工程实验技术(面向21世纪课程教材) 中国农业出版社生物工程技术实验指导高等教育出版社2004年5月 1 电子天平 小型 1台 2 超净工作台 小型 1台 3 超纯水仪 小型 1台 4 离心管 50ml 1袋 5 烧杯 100～500ml 12个 6 移液枪 100-1000 ml 6个 7 量桶 50～1000ml 5个 8 pH测定仪 小型 1台 9 高压灭菌锅 小型 1台 4．实验内容提要 （1）实验的目的、意义 （2）实验注意事项 （3）主要仪器介绍 （4）试剂配制 氨苄青霉素储存液（无菌水配制5mg/ml，分装后-20(C保存）， 配制LB培养基 胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g加200mL dd water 搅拌完全溶解，用约200(L 5N NaOH调pH至7.0，加dd water至1L， 取500ml，分两瓶，配制固体LB培养基（15％琼脂），各加琼脂45g。 121(C 20min灭菌； 1MTris-HCl配制 称取Tris60.57g，先以少量双蒸水（00~200ml）溶解Tris，加入HCl后，用HCl将pH调至， 最后双蒸水加至00ml。此液为储备液，4冰箱中保存pH8.0 EDTA 称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。NaOH调pH8.0。 70%乙醇（-20(C保存）， 10mg /mL RNase A（RNA酶A溶于10mmol/L Tris HCl pH7.5，15mmol/L NaCl中）； 在沸水中加热10分钟，冻存。 TAE缓冲液的配制 50×TAE的配制：242gTris-Cl，57.1ml醋酸，37.2g EDTA-Na2.H2O，加水至1L，室温保存。1.5ml离心管装入铝制饭盒、 移液器吸头装入相应的吸头盒，一起高压灭菌（121(C 15min）。 5．实验操作要点 DNA的酶切 1．实验特点 实验类型：验证实验 实验类别：专业 计划学时：4 每组人数：4 人 实验类别：专业课 2．实验目的与要求 （1）学习DNA的酶切方法； （2）加深对DNA体外重组技术的理解。 3．实验仪器设备 序号 主要仪器设备名称 型号规格 数 量 1 离心机 小型 1台 2 超纯水仪 小型 1台 3 电泳仪和电泳槽 小型 1套 4 紫外检测仪 小型 1台 5 移液器 10、40ul 各6个 6 电热恒温水浴锅 小型 2个 7 Eppendorf管 1.5ml 1袋 8 Eppendorf管架 6个 4．实验内容提要 （1）混合下列溶液于一个无菌的1.5ml微量离心管中： 质粒DNA