怎样写好读书报告成教专本班.ppt

1　材料与方法 1. 1　人新鲜脐带　由湖南省妇幼保健院提供。 1. 2　药物与试剂　略。 1. 3　人脐静脉内皮细胞的培养　用1640培养基常规培养。以Ⅷ因子相关抗原免疫 组化染色阳性，证实为内皮细胞。 1. 4　细胞冻融液促凝活性( PCA)的检测　采用一期凝固法。 1. 5　TF抗原测定　采用双夹心EL ISA 法, 具体过程依为A D I试剂盒说明进行。 1. 6　TF mRNA检测　用PCR 法检测。 反应条件为: 94℃变性5 min，再以94℃变性50 s，55℃退火50 s，72℃延伸1 min， 30个循环，最后再72℃延伸5 min。 材料与方法 1. 7　PKC活性测定 以Bradford法测定各部分蛋白质含量（通过测定底物的磷酸化分别测定胞浆及胞膜PKC活性高低）。 1.8　NF - κB 的检测 用免疫组织化学染色（培养的细胞用乙醇中固定和洗片后, 10%山羊血清37℃封闭,滴加兔抗人NF -κB多抗,以常规ABC方法进行免疫组织化学染色:滴加生物素化的羊抗兔IgG及生物素辣根过氧化物酶复合物(ABC) ,DAB呈色,封片后,镜检）。 1.9　统计学方法　组间均数比较用t检验,多组间比较用方差分析,行q检验。 （四）实验结果 实验结果 实验结果 2.1　内皮细胞的鉴定　(原代培养的人脐静脉内皮细胞呈单层生长，互不重叠，细胞呈多角形或短梭形,铺路石状镶嵌排列，边界清楚)。(台盼蓝染色显示98%以上实验用细胞为活细胞)。 FⅧ间接免疫荧光鉴定， 阳性率98%以上的细胞呈阳性染色，证实其为内皮细胞。 2.2TMP对TNF诱导内皮细胞TF表达与PKC途径的关系 　 PKC阻断剂Staurosporine单独对内皮细胞TF mRNA、 活性及抗原无影响( P 0105 ) ； PKC 激动剂佛波酯可明显提高TF mRNA、 活性及抗原的表达( P 0101)； TMP预处理后再加入TNFα作用2 h及6 h， 与Staurosporine预处理相似： TMP可明显抑制TNFα诱导的内皮细胞mRNA、 活性及抗原的增加( P 0101) （五）讨论和（或）结论 1. TNFα能诱导HUVEC TF的表达； 结论 2.PKC及NF -κB的活化在TNFα诱导HUVEC TF的表达中发挥着重要的作用； 3.TMP通过影响PKC途径及NF -κB的活化 来抑制TNFα诱导TF的表达。 （六）参考文献 [ 1 ] 　万敬员, 叶笃筠, 吴萍, 等. 川芎嗪对脂多糖诱导巨噬细胞环氧化酶2 表达和心肌细胞凋亡的影响[ J ]. 中国中西医结合杂志, 2004, 24 (10) : 906 – 911 [ 2 ] P ICCH IA, GAO X, BELMADAN I S, et al. Tumor necrosis factor- alpha induces endothelial dysfunction in the p rediabetic metabolic syndrome[ J ]. Circ Res, 2006, 99 (1) : 69 – 77 [ 3 ] 　SHECHTER M, MARA I I, MARA I S, et al. The association of endothelial dysfunction and cardiovascular events in healthy subjects and patients with cardiovascular disease [ J ]. IsrMed Assoc J, 2007, 9 (4) : 271 – 276 [ 4 ] STEFFEL J, ARNET C, AKHMEDOV A, et al. Histamine differentially interactswith tumor necrosis factor - alpha and thrombin in endothelial tissue factor induction: the role of c - Jun NH2 - terminal kinase[ J ]. J Thromb Haemost, 2006, 4 (11) : 452 - 460 [ 5 ] BO IV IN B, ALLEN B G. Regulation of membrane - bound PKC in adult cardiac ventricular myocytes[ J ]. Cell Signal, 2003, 15(2) : 217 – 22