第三章 酶促反应动力学(简)-2.pdfVIP

3.3 固定化酶促反应动力学 一、 固定化酶催化的动力学特征 1 影响固定化酶动力学的因素 2 固定化酶反应动力学 二、固定化酶促反应中的过程分析 1 外扩散限制对酶催化反应速率的限制 2 内扩散限制效应 酶的固定化，不仅使酶的活性发生了变 化，而且由于固定化酶的引入，反应体系 变为多相体系，例如液-固体系、气-液-固 体系等。因此在研究固定化酶催化反应动 力学时，不仅要考虑酶催化反应的本征动 力学规律，更要研究反应物的质量传递规 律，研究物质的质量传递对酶催化反应过 程的影响。建立起同时包括物质传质速率 和催化反应速率的动力学方程；这种方程 一般称为宏观动力学方程。它是设计固定 化酶催化反应器和确定其操作条件的理论 基础。 当固定化酶与主体溶液接触时，总的传质 将由下列三个过程所组成 1)底物S从主体溶液中通过界膜传递到固定 化酶颗粒外表面；（外扩散） 2)底物S再传递到颗粒内部，在酶活性部位 进行催化反面转化为产物P；（内扩散和 酶促反应） 3)产物P沿着上述相反传送路线，从颗粒内 部渗透过界膜传递到主体溶液中。（内扩 散和外扩散过程） 一、固定化酶促反应动力学基础 1.影响固定化酶促反应的主要因素 （1） 空间效应 （2 ） 分配效应 （3 ） 扩散效应 （1） 空间效应 酶的活性部位和变构部位的性质取决于酶 分子的三维空间结构。酶在固定化过程中， 由于存在着酶和载体的相互作用，从而引 起了酶的活性部位发生某种扭曲变形，改 变了酶活性部位的三维结构，减弱了酶与 底物的结合能力，此种现象称为构象效应。 载体的存在又可产生位阻效应。因为载体 的存在使酶分子的活性基团不易与底物相 接触，从而对酶的活性部位造成空间障碍， 使酶的活性下降。选择合适的载体和固定 化方法，可消除这种不利因素的影响。 （2 ）微环境效应——分配效应 由于载体和底物的疏 水性、亲水性以及静 电作用，经常引起微 环境与大环境之间不 同的性质，而形成底 物和各种效应物的不 均匀分布，这种现象 称为分配效应。 （3 ） 扩散效应 固定化酶对底物进行催化反应时，底物 必须从主体溶液传递到固定化酶内部的催 化活性中心处，反应得到的产物又必须从 酶的催化活性中心传递到主体溶液中。这 种物质的传递过程包括分子扩散和对流扩 散。这种扩散过程的速率在某些情况下可 能会对反应速率产生限制作用，特别是由 于生物物质在液体中的扩散速率相当缓慢， 而酶的催化活性又很高时，这种扩散限制 效应会相当明显。 扩散限制效应可分为外扩散限制效应和 内扩散限制效应。 前者是底物从大环境主体溶液中向固定 化酶表面传递过程的一种扩散限制效应。 它发生在固定化酶界面周围的处于停滞 状态的液膜层。由于外扩散阻力，底物 将在固定化酶的周围形成浓度梯度。扩 散阻力受固定化酶界面周围溶液的相对 速度的影响。因而外扩散阻力随着搅拌 速度的增加而减少。 内扩散阻力发生在多孔性固定化酶载体的 内部，它是底物传递到固定化酶内部的酶 部位时的一种扩散限制效应。内扩散限制 效应往往与酶催化的化学反应同时进行。 由于微环境内的化学反应造成底物的消耗 和产物的积累，形成浓度的不均匀性。而 在微环境内底物的消耗和产物的积累程度， 也常和这些物质的分子量大小有关。 从图中可以看出， 由于扩散限制效应 的存在，底物浓度 从液相主体到固定 化酶外表面，再到 内表面是依次降低， 向产物浓度分布则 与此相反。 2、固定化酶反应动力学 在上述讨论中，空间效应难以定量描述， 并且它与固定化的方法、载体的结构及性 质、底物分子大小和形状等因素有关。空 间效应的影响一般通过校正动力学参数 V 和K 来体现的。—— 本征动力学 max