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微生物学思考讨论错题整理 实验一 显微镜的使用和细菌基本形态观察 观察标本时，必须依次用低倍镜、高倍镜，原因是低倍镜视野比较大，能看到的范围大，容易找到观察的目标，然后用放大倍数高的高倍镜或油镜有目的的观察。 实验二 环境微生物的检测 本实验只取了台面的小部分样品，经培养后观察到4种不同的菌落，且各菌落皆有自己鲜明的特点。菌落的数量反映了A种细菌在台面的存活能力最强，故种群数量大，相对于B,C,D细菌在实验台台面有竞争优势。由于台面是平面，空气是立体的，故空气中的细菌比台面的多，而且空气中的微生物与暴露时间有关。由此可见，一个清洁的实验台有利于实验的成功（不被污染）。 通过本实验，在防止微生物污染和扩散方面，我体会到我们生活在微生物的包围之中，微生物无处不在，故十分容易对培养基造成污染，因此实验过程要求无菌操作，整个微生物操作过程均应在酒精灯旁或在洁净台内进行，以避免污染微生物。实验过后，所有带活体微生物的器皿和材料均应灭菌，防止微生物扩散，污染环境。 实验三 细菌简单染色及革兰氏染色 革兰氏染色成败的关键因素是脱色，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。 其他影响因素： 菌龄：选用对数生长期为宜，若太老，由于菌体死亡或自溶使革兰氏阳性细菌转呈阴性反应。 涂片厚薄均匀度：太厚会使脱色不完全造成假阳性。 媒染时间、脱色时间及脱色时的酒精浓度（95%乙醇，不应被稀释） 制片时通过加热固定使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片上，且不破坏细胞形态。但要注意避免高温所导致的菌体变形。 实验五 微生物的血球计数板直接计数及细胞大小的测定 血球计数板直接计数法的原理+ 该法的有效测量浓度范围是10*6以上+ 用该法进行计数的适宜浓度是 10*7个/ml左右 实验六（一）培养基的配制及灭菌 1.湿热灭菌法的优点+ 缺点： 1）设备费用高 2）不能用于对热不稳定的物料灭菌 2.请设计干热灭菌和湿热灭菌效果比较的方案 （二）微生物的分离纯化与菌落计数 1.平板菌落计数法+ 因为+，所以计数结果往往偏低，故使用CFU（注意用科学计数法表示数量）表示样品活菌含量。 该法的结果受培养条件的影响，故需标示培养条件。 该法可以通过培养条件，而可以实现样品中不同种类微生物的分别测量。 2.结论：菌落+，形态是否单一；个体形态+，是否均一。 最终是否得到了纯培养。 3.划线时要快速，使接种环在平板上平稳滑动。 4.土壤样品应充分振摇！ 5.当平板上长出的菌落不是均匀分散的，而是集中在一起，你认为问题出在哪里？ 答：因为倒平板后未立即摇匀。 6.血球板直接计数法：1）优点：直观，快速，操作简单 2）缺点：仅适用于菌液浓度高于10*8个/ml的样品，菌浓度低时计数不准确或无法计数。该法不适用于丝状微生物的计数，但可计数它们的孢子。 平板菌落计数法：1）优点：可通过不同的培养条件对样品中的微生物进行分类分别测量，方法应用范围广泛，几乎可以测量任何样品。 2）缺点:操作繁琐耗时 （三）微生物的生理生化特征 1.细菌菌株（编号）：来源：XX由XX样品，经XX培养基XX及XX分离得到的单菌落。经镜检，证实为纯培养的细菌。 （四）目标微生物的筛选 1.实验中，若两个产抗生素的对照组：细黄链霉菌和青霉均未得到产抗生素阳性的结果，说明“抗生素产生情况”的实验是失败的。得出的“放线菌XX号不产青霉素“的结论也就不可靠。应予以讨论。 实验七 噬菌体效价的测定 观察比较平板上的噬菌斑的生长情况： 对照平板上无噬菌斑出现，但形成了铺满整个平板之菌苔。 + 2.实验中影响噬菌斑大小的因素有： 上层琼脂的浓度对噬菌斑能否正常形成有主要影响 下层琼脂的营养必须适宜于宿主的生长 噬菌体为烈性噬菌体数与宿主细胞浓度比例越高，菌斑越大 外在因素：培养时间，温度，培养基类型会影响细菌和噬菌体的生长 情况和噬菌体对细菌的侵染程度，从而影响噬菌斑大小。 与宿主细胞的特异性越低，形成噬菌斑的机会越大。 3.保温过程中剧烈摇晃试管可能会使噬菌体难以在宿主上吸附。