大鼠脂肪型脂肪酸结合蛋白（FABP）酶联免疫分析（ELISA）.doc

大鼠脂肪型脂肪酸结合蛋白（FABP）酶联免疫ELISA） 试剂盒使用说明书FABP）酶联免疫分析试剂盒 使用目的： 本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中脂肪型脂肪酸结合蛋白（FABP）含量。 实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定中FABP）水平。用纯化的FABP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入FABP），再与HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMB在酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的FABP）呈正相关。用酶标仪在nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品FABP）浓度。 试剂盒组成 标准酶板稀释液稀释液-20℃保存，但应避免反复冻融操作步骤 μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为36ng/L，24ng/L ，12ng/L，6ng/L， 3ng/L）。 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻混匀分钟甩干μl，空白孔除外。 μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应。450nm波长依序测量各孔的度（OD值）计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以，即为样品的实际浓度。 浓洗涤液会有析出，稀释时可在水浴中加温助溶乘以 保存条件及有效期 1．；2-8。 2