超滤法结合HPLC法测定白藜芦醇血浆蛋白结合率.docVIP

超滤法结合HPLC法测定白藜芦醇的血浆蛋白结合率 　　【摘 要】 目的：建立测定白藜芦醇与大鼠、小鼠、家兔血浆蛋白结合率的方法，并测定其结果，为白藜芦醇的药代动力学及临床用药提供参考。方法：采用超滤法结合HPLC法对白藜芦醇与大鼠、小鼠和家兔血浆的蛋白结合率进行测定。结果：白藜芦醇在0521～2297μg的线性关系良好，标准曲线为Y=11434X-00409（r=09995）。白藜芦醇与大鼠血浆、小鼠血浆和家兔在0504μg/mL、504μg/mL、2016μg/mL的含药血浆中的蛋白结合率为（9032±009）%、（8932±004）%、（9152±012）%。结论：该方法重复性和专属性好，操作简单、快捷，能够满足样品定量分析测定要求；测定结果表明，白藜芦醇与血浆蛋白有很强的结合，且在考察范围内蛋白结合率对血药浓度无明显的依赖性 【关键词】 白藜芦醇；超滤法；HPLC；血浆蛋白结合率 【中图分类号】R2841 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）20-0023-04 白藜芦醇（trans-3，5，4-o-trihydroxystilbene）是存在于虎杖、花生、桑椹、葡萄等植物中的一种生物活性极强的多酚类物质，具有抗肿瘤[1]、抗氧化[2]和抗炎[3]等多方面作用，且在抑制血小板聚集、预防腹部、心脏病、关节等外科手术后纤维组织粘连和舒张血管方面也具有良好的药理活性[4-6]。近年来其颇受关注和研究，是一种潜在开发的药物。但其在药代动力学方面研究较少，尤其在血浆蛋白结合率方面并无研究。而药物的血浆蛋白结合率是药代动力学中重要参数，与药物在体内的吸收、代谢、分布和排泄等密切相关[7-8]，对今后其新药的研发和临床应用具有重要的意义[9-11]。实验采用超滤法和HPLC结合的方法[12-15]对白藜芦醇和大鼠、小鼠、家兔的血浆蛋白结合率进行研究，为对白藜芦醇药代动力学的研究提供参考 1 仪器与材料 11 仪器 Agilent1260型高效液相（含DAD检测器，美国Agilent有限公司）；WP-UP-III-10沃特浦实验室用超纯水器（四川沃特尔科技发展有限公司）；超滤管（醋酸纤维素膜，相对分子质量截留值10kD，Millopore公司）；TG1650-WS 型高速离心机（上海卢湘仪）；SK-1快速混匀器（江苏金坛市江南仪器制造厂）；AVW20D型电子天平（日本岛津制作所） 12 试药 白藜芦醇（批号：111535-200502，中国药品生物制品鉴定所）；甲醇（色谱纯，美国FISHER公司）；超纯水（自制）；磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化钠、磷酸氢二钾等均为分析纯 13 动物 SD大鼠，雄性，体重（200±20）g，由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供（合格证号：SCXK（吉）2011-0004），毛细管眼眦取血，置肝素钠抗凝离心管中，3000r/min离心10min，分离血浆，置于4℃冰箱中冷冻备用。SD小鼠，雄性，体重（200±20）g，由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供（合格证号：SCXK（吉）2011-0004），毛细管眼眦取血，置肝素钠抗凝离心管中，3000r/min离心10min，分离血浆，置于4℃冰箱中冷冻备用。实验兔，雄性，体重18～22kg，由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供（合格证号：SCXK（吉）2012-0002），毛细管眼眦取血，置肝素钠抗凝离心管中，3000r/min离心10min，分离血浆，置于4℃冰箱中冷冻备用 2 方法与结果 21 色谱条件 Venusil MP-C18（250mm×46mm，5μm）色谱柱，流动相为甲醇-水（V∶V=45∶55），流速1mL/min，柱温为30℃，检测波长为290nm，进样量为10μL，理论塔板数按照白藜芦醇计算不低于2000，且与其他物质分离度良好，符合药典规定 22 溶液配制 221 等渗PBS溶液的配制 分别称取磷酸二氢钾259g，磷酸氢二钾1411g，氯化钠199g，磷酸氢二钾1411g，置于1000mL容量瓶中，加入适量超纯水，超声溶解，超纯水定容至刻度，摇匀，即为等渗PBS溶液 222 对照品溶液的配制 精密称取白藜芦醇对照品约5mg，置1L容量瓶中，加入适量等渗PBS，均匀混合，定容至刻度，摇匀，即得浓度约为5μg/mL的白藜芦醇储备液 223 供试品溶液的配制 精密称取白藜芦醇标准品252mg，置于50mL容量瓶中，加入等渗PBS溶液适量，充分溶解，定容至刻度，摇匀。分别吸取025、25、100mL加入25mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀，得浓度为504、504、2016μg/mL的PBS溶液。分别精密吸取50μL，置于450μL空白大鼠、小鼠、家兔