儿科常见病毒实验室检测方法进展.pdfVIP

主堡』L型苤查垫!!生!旦箜!Q鲞箜!塑g!i!』￡型i!!!：』!!!!型!!!!：!!!：iQ：盟!：! ·65· ．综述． 儿科常见病毒的实验室检测方法进展 王婷婷钱渊 病毒感染在儿科感染性疾病中占有重要地位。与儿科 同时接种多种细胞进行检测的瓶颈。Navarro．Mari等‘4o采用 感染相关的常见病毒包括呼吸道病毒、肠道病毒及其他。同 一感染途径的不同病毒感染人体引起的症状常相似，临床上 法检测常见7种呼吸道病毒，结果显示在敏感性与传统细胞 难以鉴别，抗生素治疗对于病毒感染无效，且滥用可诱发细 培养相当的基础上，新方法将检测周期缩短至48h。Huang 菌耐药。因此，病原学检测对于病毒感染性疾病的临床诊断 和Turchek。51初步将水貂细胞MvlLu和人肺腺癌细胞A549 J 及治疗具有越来越重要的指导作用。针对病毒本身的检测 混合离心培养分离流感病毒等呼吸道病毒；Barenfanger等‘6 一般包括病毒分离、电镜观察、病毒抗原检测和病毒核酸检 应用前述2种细胞混合组成的R—mix细胞离心培养结合间 测，检测的结果具有较为直接的病原学诊断价值；而针对病 接免疫荧光法检测临床呼吸道标本中的常见7种呼吸道病 毒特异性抗体的检测是病毒感染的间接诊断指标，在应用时 毒，阳性结果报告时间缩短至1．4d。混合快速细胞培养的 需结合临床，包括感染部位(全身的还是局部的)、采血时间 时效性显著提高，敏感性与传统方法相当或略高¨…，随着低 距发病天数等对检测结果进行综合判断。 R—Mix 温保存的即用型R—mix细胞(cryopreservedReady 一、病毒培养 Cell)的应用一J，该技术有望为基础研究及临床诊断提供更 1．传统的细胞培养：儿科常见病毒多使用传统的细胞 有价值的客观依据。 培养方法进行病毒分离。常用的标本包括呼吸道分泌物、鼻 二、电子显微镜检测 咽拭子、脑脊液、血液、组织和粪便等。与其他诊断技术相 对于一些不能进行常规培养的病毒(如杯状病毒、星状 比，病毒培养相对开放，可以检测多种病毒，包括当时未被怀 病毒)，或当出现其他方法难以确定的未知病毒感染(如 疑甚至未被发现过的新病毒。但作为一项诊断技术，它对标 SARS)时，可以通过电镜观察病毒的形态来确定病毒的科 本储存和运送要求严格(保证有病毒存活)，需要熟练的技 属，为进一步诊断提供依据。在制备电镜样品时，可以利用 术人员操作，检测时间较长(一般3～21d)；另外，一种细胞 抗原一抗体结合的原理使病毒颗粒聚集，从而更容易通过电 常常只对特定的几种病毒敏感，对于一个未知病原的样品， 子显微镜直接观察(免疫电子显微技术)。20世纪80年代 常需要同时在多种细胞中进行接种培养。尽管如此，病毒培 后发展起来的冰冻电镜技术，因为样本制备过程简短(无需 养依然是公认的病原诊断“金标准”，无论是鉴定分离新发 脱水)，可更好地保持病毒的自然结构，分辨率更高¨…，可以 病毒，还是对抗病毒药物敏感性的检测，尤其当原有病毒发 更清楚细致的观察到病毒颗粒的细节…J，并且可显示分子 生较大程度的变异时，其地位是其他检测方法无法替代 水平的高级图像¨“，开辟出病毒诊断、病毒结构及致病机制 的…。 研究的新领域，但冰冻电镜精巧昂贵，对人员技术要求高，不 vial 2．离心细胞培养法(shellculture，SVC)：SVC是一 适用于临床标本的常规检测。