植物组织造就罕见题目及对策.docVIP

植物组织培养常见问题及对策 摘要：本文从植物组织培养中常见的问题污染、玻璃化、褐化、生根难、炼苗难等问题进行阐述，并提出相应的解决办法，为以后的组培奠定基础。 关键词：组织培养；问题；对策 Plant tissue culture common problems and countermeasures Abstract: this article from the plant tissue culture of common problem pollution vitrification Browning tried hard to take root seedlings paper describes problems, and puts forward the corresponding solutions for the future of tissue, lay the foundation Keywords: tissue culture; Problem; countermeasures 引言 植物组织培养技术，作为现代生物技术的一个重要手段，已在工厂化育苗、种苗脱毒复壮、遗传育种、种质资源的保存与交换等领域得到了广泛应用。在近几年开展植物组培快繁技术研究和生产过程中，发现有几个问题较常见，有时会严重影响工作效率和进展，降低组培快繁的经济效益。现将这些问题及解决对策总结如下。 1污染 组织培养是在无菌条件下进行的，在培养过程中若有微生物污染，组培将无法进行。对于工厂化育苗来说，污染往往是影响生产任务按时完成的主要原因。 1．1产生污染的因素 1．1．1外植体 通常多年生的木本材料比1—2年生的草本材料带菌多；老的材料比嫩的带菌多；田间生长的材料比温室的带菌多；带泥土的材料比清洁的带菌多。18中以雨季的材料带菌多，1 d中以中午阳光最强时的材料带菌少。 1．1．2培养基 高压蒸汽灭菌的温度、压力、时间和正确使用情况，以及过滤灭菌中过滤膜孔径、过滤灭菌器械的灭菌处理、过滤灭菌操作等均影响培养基的灭菌效果。 1．1．3操作环节 接种室是否清洁、干燥、密封，是否经常用紫外线灯照射、甲醛熏蒸、70％酒精喷雾杀菌等，操作是否熟练。 1．1．4培养环境 培养室要求清洁、密闭，每天用70％酒精喷雾除菌、降尘，每周用少量甲醛熏蒸灭菌，如有空气过滤装置效果更好。培养室相对湿度太高时，污染加重。 1．2防止和克服污染的措施 1．2．1接菌室的灭菌 在每次接种前半个小时，用20％ 的新洁尔擦洗室内设备、工作台面，再用紫外线灯照射20 min。使用前还可以喷洒70％ 的乙醇，使空气中灰尘迅速下降。在进行组培时。除了培养基、接种材料、器皿和用具保证无菌外，同时在接种时还需要严格进行无菌操作[8]。 1．2．2植物材料的选择及防止污染 由于不同的植物材料品种，不同的取材部位、取材大小、取材年龄以及取材肘期，其带菌量不同，为此在取材时应仔细选择，以减少污染的发生[4]。一般在春季采集生长健壮的材料为佳，在连续晴天的中午取材，选取洁净、生长旺盛的部位，现取现灭菌。以木本植物为培养材料时，要采取一些预防措施，尽量避免材料带菌。如外植体生长环境较脏，可在室内或无菌条件下对枝条进行液体培养催芽，即用刷子沾少量的洗衣粉或肥皂稀溶液把枝条刷洗干净，进行水培或者液体培养，选择新抽生的嫩枝或者嫩芽作为外植体，可降低污染率。或者在无菌条件下对采自田间的枝条进行暗培养，待抽出徒长的黄化枝条时取材，可有效减少污染。 2 玻璃化 2．1玻璃化苗的特征和危害 在进行组织培养时，经常会发现试管苗生长异常，表现为试管苗叶、嫩梢水渍状或呈水晶状透明或半透明；整个植株矮小肿胀、失绿；叶片皱缩成纵向卷曲，脆弱易碎。这种现象称为“玻璃化”，这种苗称为玻璃化苗[8]。玻璃化苗中因体内含水量高，干物质、叶绿素、蛋白质、纤维素和木质素含量低，角质层、栅栏组织等发育不全，表现为光合能力和酶活性降低、组织畸形、器官功能不全、分化能力降低、生根困难、移栽后很难成活。玻璃化苗在植物组培中很普遍，有时多达50％ 以上，严重影响繁殖率，造成人、财、物的极大浪费。 2．2玻璃化苗的成因 琼脂和蔗糖浓度与玻璃化苗的比例呈负相关，琼脂或蔗糖浓度越高，玻璃化苗的比率越低。培养基的水势影响玻璃苗的形成，液体培养是导致玻璃化的主要原因，只要降低培养容器的相对湿度，就可以降低玻璃化苗的比例，试管苗玻璃化可能是培养材料对培养基内水分状态不适应的一种生理变态。培养基中BA浓度和培养温度与玻璃化呈正相关，乙烯对玻璃化的影响，与改变组织的生理生化及纤维结构有关。玻璃化苗也是培养瓶内气体与外界交换不畅造成的，密闭的封口材料是导致玻璃化的原因之一。 2．