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一种利用蜜糖废水产生PHA的侧流工艺的建立方法
摘要
试验建立了一种利用蜜糖废水生产聚羟基烷酸脂(PHA)的三阶段过程。该过程包括(1)糖蜜废水酸酵解,(2)PHA富集菌的筛选,(3)利用富集完毕的污泥和酵解之后的糖蜜废水批次累积PHA。在发酵阶段,试验评估了PH(5~7)对有机酸型体分布以及产率的影响。PH较高时乙酸和丙酸为主要产物,然而较低的PH值有利于丙酸和戊酸的产生。试验评估了利用乙酸盐和发酵糖蜜废水为基质筛选的两类菌群的PHA积累能力。考察了有机酸型体分布对利用醋酸盐筛选菌群产生的多聚体的组成以及产率的影响。PHA富集产率在0.37到0.50CmmolHA/Cmmol VFA之间变化。试验观察到了被利用有机酸的类型和多聚物成分的一种直接关系。在糖蜜废水中,低氨氮浓度(0.1Nmmol/l)促进了PHA的储存(0.59 Cmmol HA/Cmmol VFA)。此外,试验建立了一种控制反应器运行利用发酵糖蜜废水筛选PHA富集菌群的方法。利用高有机负荷以及低氨氮浓度选择了一种具有稳定储存PHA能力的菌群,富集产率达到0.59Cmmol HA/Cmmol VFA),这一能力与醋酸盐筛选菌相似。
前言
聚羟基烷酸脂被认为是优良的可生物降解塑料的候选者。这类含有多种单体组分具有热塑性的多聚物是被细菌作为能量和碳储存物质的。它们的结构特性与聚丙烯的结构性质一致,同时又具有诸多优势:可生物降解、可生物相容、能进一步由可再生碳源产生从而使可持续生产过程成为可能。
然而,PHAs与石化工业衍生的塑料制品在成本上相当大的差异成了这类高聚物部分替代后者的阻碍。目前,商业可行的PHAs是由纯菌(野生的和基因重组的菌种)和纯底物(通常很昂贵)工业化生产而来。PHAs的价格主要取决于底物成本,约占总成本的40%(Choi和Lee,1997)。最近十年来,一系列低成本的碳源基质(例如淀粉、木薯粉水解物、乳清和蜜糖)在纯菌生产PHA过程中得到检验。但是,PHA的生产成本仍然很高,这主要由投资成本和运行成本引起的。
有许多旨在建立更具有成本效益的产PHA工艺的尝试,其中包括混合菌群产PHA工艺。混合菌群是一类未知组成的微生物群体,这类群体是由强加于生物系统之上的运行条件选择而来。此工艺无需灭菌,因此节省了能源和设备成本。混合菌群在瞬时碳源供给的条件下开始储存PHA(Majone等,1996;Van loosdrecht等,1997),瞬时碳源供给指的是feast—famine或者好氧动态投料(ADF),这种方式导致一种非平衡的细胞增长。在碳源过剩阶段,外部的基质被摄取转化为多聚体在细胞内部储存。当底物耗尽,积累的多聚物就会作为细胞生长和维持的能量与碳源。
不同于纯菌培养的是,混合菌群不会将碳水化合物作为PHAs储存而是作为糖原储存(Dricks等,2001)。然而,可挥发性脂肪酸可以被混合菌群转化为PHAs储存。已有许多研究试验了利用合成有机酸由混合菌群生产PHA(例如,醋酸、丙酸、丁酸和戊酸)。(Beccari等,2002;Dionisi等,2004;Serafim等,2004;Lemos等,2006)。Serafim等(2004)发现:在动态补料条件下,利用乙酸盐作为碳源的混合菌群可以积累含量相当于细胞干重65%的PHB。由混合菌群利用废料或低成本基质生产PHA的研究只有极少数报道(RHu 等,2003;Dionisi等,2005;Bengtsson等,2007)。由富含碳水化合物的基质合成PHA需要一个将基质中糖分转化为VFA的预前厌氧发酵步骤。
在混合菌群合成PHA的诸多挑战中,其中一个是细菌的筛选。选择一个具有高效稳定富集PHA能力的菌群对此工艺的效果具有重要作用。几乎所有关于混菌合成PHA的研究都将细菌筛选和PHA富集分别作为两个阶段来运行(Dionisi等,2004;Serafim等,2004;Lemos等,2006)。仅有少数研究报道了三阶段合成工艺的使用,在这种工艺当中在菌种筛选和PHA富集之前增加了厌氧发酵阶段。Dionisi等在2005年提出利用橄榄油制造厂废水(OME)合成PHA的工艺,在此工艺当中PHA富集菌由合成有机酸混合物筛选而来,随后利用发酵之后的OME和筛选菌群批次合成PHA。Bengtsson等在2007年提出利用造纸废水合成PHA的三阶段工艺,包括造纸废水的发酵、利用发酵废水筛选菌群、利用发酵废水和筛选菌群合成PHA三个连续的步骤。但是,尚不清楚哪一种筛选方法顾及到了提高工艺的PHA产率和产量的问题。
本试验研究了利用蜜糖废水(一种蔗糖提炼厂的副产物,具有很高的含糖量,约为干重的50%)由混合微生物菌群合成PHA的工艺。试验使用了三阶段工艺,包括连续三个过程:(1)糖蜜废水酸化降解,(2)在充盈—饥饿状态下筛选PH
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