2001-木聚糖酶基因克隆表达与分泌及定点诱变研究进展.pdfVIP

《生物工程进展》2001 ,Vol. 21 ,No. 2 木聚糖酶基因克隆、表达与分泌及定点诱变研究进展 刘相梅 　祁 　蒙 　曲音波 ( 山东大学微生物技术国家重点实验室,济南　250100) β 摘要 　木聚糖酶专一性水解木聚糖分子中 14 糖苷键 ,在制浆造纸、食品、纺织、饲料、能源工业 中具有广阔的应用前景。随着各种新技术的发展与应用 ,木聚糖酶基因的研究取得了很大进展 , 不仅克隆了许多不同来源的木聚糖酶基因 ,研究了木聚糖酶基因在同源和异源寄主中的表达和分 泌 ,而且还使用定点诱变技术探讨了木聚糖酶的结构与功能的关系并对酶的性质进行改造以满足 工业生产的需要。 关键词 　木聚糖酶基因 　表达与分泌 　定点诱变 ( 　　木聚糖酶 [ EC3218 ] 是一类以内切方式水 含有深蓝色 RBB木聚糖 Remazol Brilliant BuleXy β ) 解木聚糖分子中 14 糖苷键的酶 ,其水解产物主 lan 的选择平板上 ,含有木聚糖酶基因的阳性克隆 要是木二糖和木寡糖。该酶具有广泛的应用前景。 子可分解该蓝色底物从而在菌落周围形成透明 [1 ] β 利用木聚糖酶对含有半纤维素的纸浆进行预处理 , 圈 ;另一种方法基于刚果红能与有 14 糖苷键 可以减少漂白工艺中的有害化学品的用量 ,从而减 连接的纤维性底物紧密结合染成红色 ,糖苷键水解 轻环境污染 ;而且可提高纸浆的漂白度 ,降低纸张的 后这种红色又可以被氯化钠溶液脱去的原理 ,将转 脆性 ,使纸张不易返黄 ;还可以作为饲料添加剂去除 化子点种或涂布在含有木聚糖的选择平板上生长过 戊聚糖类的抗营养因子 ,提高饲料的利用率 ,改善其 夜 ,用 01 %刚果红染色 30 分钟 ,用 1molL 氯化钠 营养价值 ;用于面包加工可提高面包的松软度 ,增大 溶液脱色 20 分钟左右 ,阳性克隆子的菌落周围形成 ( ) 面包体积。很多细菌和真菌均可产生木聚糖酶 ,有 透明圈 背景是红色 ,若再用 1molL 的盐酸处理 , 些木聚糖酶已被分离纯化并对其进行了性质研究 , 则背景染成深蓝色 ,透明圈更明显并可保持较长时 木聚糖酶基因也已被克隆和表达 ,各种来源和性质 间[2 ] 。也有基于这两种方法把转化子培养在普通培 不同的木聚糖酶基因还在不断地被克隆出来 ,并从 养基上生长过夜 ,再倒上层选择培养基检出阳性克 分子水平探索了木聚糖酶分子的结构和功能 ,为构 隆子[1 ] 。Bernier[3 ] 等是用氯仿处理选择平板上生长 建高效表达菌株 ,研究木聚糖酶的合成调控及木聚 过夜的菌落 1 小时 ,干燥表面 30 分钟 ,再倒含有溶 糖的降解机制等奠定了基础。 菌酶的上层培养基培养 16 - 24 小时 , 阳性克隆子释 放的酶分解木聚糖 ,直接观察平板上浑浊的培养基 1 　木聚糖酶基因的克隆 背景下菌落周围出现的透明圈。克隆的具有代表性 自七十年代末,八十年代初开展木聚糖酶基因 的部分木聚糖酶基因总结