蛋清高F值寡肽可控酶.pptVIP

蛋清高F值寡肽可控酶解条件的筛选及其制备的研究 文献综述 高F值寡肽混合物主要是指由2~7个氨基酸残基所组成的混合小肽 (或称寡肽)体系。在该混合物中支链氨基酸与芳香族氨基酸含量的克分子数比值称为F值。 课题研究背景 目前国内的寡肽市场主要呈现高F值寡肽产品生产能力低、供不应求的趋势，而对于蛋清蛋白作为一种高F值寡肽产品的制备原料，较其它蛋白质有着得天独厚的优势。主要表现在含有的蛋白质种类丰富、含量较高、杂质较少、支链氨基酸较芳香族氨基酸的含量高等特点，且利用蛋清作为制备高F值寡肽混合物的原料成本较低，适用于工业化生产。 高F值寡肽混合物的生理功能 （1）高F值寡肽混合物具有改善手术后和卧床病人的蛋白质营养状况的功能 高代谢病人和长期卧床鼻饲病人的代谢特点之一就是蛋白质合成代谢减弱，而蛋白质分解代谢增强，使机体处于负氮平衡状态。补充外源性的支链氨基酸，可节省来自蛋白质分解的内源性支链氨基酸从而起到节氮作用。 （2）辅助治疗肝性脑病 肝硬化病人的血浆中氨基酸模式处于非正常状态，从而使支链氨基酸通过血脑屏障的比例较高。过高的支链氨基酸在大脑中而使中枢单胺能神经递质代谢发生紊乱。大量的动物实验和临床经验表明，口服或注射高F值寡肽混合物能起到纠正血浆及脑中氨基酸的病态模式，改善肝昏迷和精神状态的作用。实践证明，当病人处在严重的肝昏迷时，给予支链氨基酸试剂而使脑中氨基酸模式的F值达到3时，病人就可降到I期或零期；当病人处在I期或II期时，口服或静脉注射支链氨基酸后全部清醒。在改善肝昏迷程度上，高F值制剂疗效很好，可使大部分病人在6~24小时内清醒。 （3）抗疲劳作用 支链氨基酸不仅是供能物质，而且还能影响芳香族氨基酸入脑，脑内芳香族氨基酸的增多，也是造成疲劳的重要因素之一，所以支链氨基酸试剂成为一种重要的营养剂。在赵稳兴等人的研究中还认为补充支链氨基酸可降低蛋白质的分解，可促进糖异生，促使生长激素的分泌，有利于脂肪的氧化。长时间大强度运动补充支链氨基酸可阻止血红蛋白降解，改善生理和心理方面适应能力，有抗中枢疲劳的作用。 （4）解酒醉功能 酒精在人体内氧化和排泄速度缓慢，只有不到2%的酒精可直接经肾从尿中排出，经肺从呼吸道呼出或从皮肤的汗腺随汗排出，余者必须经过生物氧化才能被清除。高F值寡肽混合物通过提高血液中丙氨酸和亮氨酸浓度产生稳定的NAD＋，从而有效的降低了血液中乙醇浓度。同时谷氨酸、脯氨酸及精氨酸也对酒精代谢有影响。所以，摄入含有大量支链氨基酸的蛋白肽对酒精代谢有积极的影响。 （5）抑制癌细胞增殖 癌症患者对于支链氨基酸消耗较多，从而加速病情的发展。日本正幸等学者进行的动物试验证明，支链氨基酸在促进荷瘤大鼠肌肉蛋白合成改善平衡同时，对移植的吉田肉瘤生长无刺激作用。目前尚无应用氨基酸制剂后病人体内肿瘤生长加速的报道，为此有人正在研究配制不平衡氨基酸输液配合化学治疗以抑制癌细胞的生长。 国外高F值寡肽技术的研究状况分析 1976年Yamashita M等首次利用胃蛋白酶和链酶蛋白酶从鱼蛋白和大豆蛋白中制取了低苯丙氨酸含量的寡肽混合物；1982年Nakhost Z等采用a－凝乳蛋白酶和羧肽酶A作用于大豆蛋白也得到了类似的产物；1986年Soichi A等研究了胃蛋白酶、链酶蛋白酶、木瓜蛋白酶以及a－胰凝乳蛋白酶修饰乳清蛋白制取低苯丙氨酸寡肽的各种生产工艺和方法，并确定出最佳水解工艺参数；1990年Shinya T等采用嗜碱蛋白酶和肌动蛋白酶降解玉米醇溶蛋白研制出无苦味的高F值寡肽；1992年Shiji A等以牛乳酪蛋白为原料也成功地制取了高F值寡肽混合物。 国内高F值寡肽技术的研究状况分析 1992年江南大学的王梅博士首次采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶降解玉米并制得了F值为31.0寡肽混合物；近些年来，对蛋清高F值寡肽制备技术的研究的学者还有迟玉杰教授，田波博士等。 本实验研究的目的及意义 本研究主要是通过对蛋清高F值寡肽制备技术及其稳定性的研究，筛选出最佳的制备条件，从而为探索一条提高鸡蛋附加值的技术路线提供理论依据及数据支持。 实验方法 通过福林酚试剂法对五种内切蛋白酶及两种外切蛋白酶进行酶活力测定，并通过pH－stat法对七种蛋白酶对蛋清蛋白的水解效果进行考察，同时结合体积排阻色谱系统对蛋白酶水解物分子量分布范围进行分析，从而找到一条准确，可靠的制备路线，为今后的中试生产提供依据。 试验工艺流程 试验步骤1. 福林酚试剂法测定酶活力 蛋白酶的筛选 碱性蛋白酶试验条件的筛选及正交试验1. 碱性蛋白酶2709加酶量与水解度单因素试验 2. 碱性蛋白酶2709 pH值与水解度的单因素试验 3. 碱性蛋白酶2709水解时间与水解度的单因素试验 4.碱性蛋白酶