生物化学论文《RNA干扰——理论发展和应用展望》.docxVIP

RNA干扰——理论发展和应用展望南京大学化学化工学院131130125 黄若和摘要RNA干扰以及基因沉默是目前分子生物学的一个热门的研究领域，对于基因工程和医药研究的发展有着巨大的潜在推动力。RNA干扰通过对mRNA的特异性抑制从而达到高效的基因沉默，已经显示出了其可能带来医疗技术的突破性发展。本文是对RNA干扰的原理、RNA干扰与基因沉默的理论发展、其在未来可能的应用发展进行的简要综述。AbstractRNA interference (RNAi) and Gene Silence are one of the most favorite research fields in molecular biology, RNAi has great potential in the development of the Genetic Engineering and Medical Research. RNAi can make effective Gene Silence through the specific inhibition on mRNA, so it has shown that it can bring a great breakthrough in medical technology. This essay is a brief review on the theory of RNAi and its developments in theories and applications.正文I概述RNA干扰（RNAi）主要是指外源性的双链RNA（double-stranded RNA, dsRNA）在体内引发的基因沉默（Gene Silence）现象。RNAi是一种序列特异性的转录后基因沉默机制（post-transcriptional gene silence, PTGS），其在生物体中是普遍存在的。RNAi的作用机制可概括如下：dsRNA进入细胞后，通过ATP依赖性RNA酶III（Dicer,DCR），变为含21-25bp的siRNA（short-interference RNA）；siRNA是引发核酸酶降解mRNA的引导物，并与AGO（Argonaute）蛋白结合形成RNA诱导沉默复合体（RNA-induced silencing complex, RISC），RISC对siRNA解链放出反义RNA并与对应的mRNA结合，使其内源性降解；在靶mRNA被降解后，RISC继续靶定其他的mRNA。同时，有些情况下还会产生扩增效应：siRNA或其反义RNA可通过依赖于RNA的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA Polymerase, RdRP）与靶mRNA互补的RNA（cRNA）共同重新合成dsRNA，并通过上述机制生成次级siRNA。通过扩增效应，mRNA的表达会得到完全的抑制，这也是RNAi高效的原因之一。除了通过siRNA外，在生物体内还发现了另一种RNAi机制：微小RNA（microRNA, miRNA），miRNA是由一种内源性发夹（hairpin）结构转录产物经DCR加工得到的单链RNA，并与AGO蛋白结合生成miRNA-蛋白复合物（miRNA-protein complex, miRNP），通过与靶mRNA结合阻碍其翻译，达到基因沉默的目的。（图1:RNAi的作用机制）RNAi理论虽然是从1990年代才开始发展，但它却逐渐受到人们的重视。1998年在《Nature》上共同发表论文正式提出RNAi理论的Andrew Fire和Craig C Mello 被授予了2006年诺贝尔生理学或医学奖，以表彰他们在基因技术的使用方面提供了“令人激动的可能性”、发现了一种有效中止有缺陷的基因运传的机制、这为研发控制这种基因和与疾病作斗争的新药提供了可能性。从RNAi的作用机制中可以看出，由于siRNA或miRNA对mRNA有着特异性的选择和高效的抑制能力，只要能够确定所要作用的mRNA或对应的基因，就可以针对性地抑制mRNA的基因表达，同时也会将其对其他基因表达的影响降至最低。利用这一点，可以发展很多的治疗技术，用于治疗目前难以治疗的由RNA病毒所引起的疾病，或者一些由于非人体所需的基因表达所导致的疾病比如癌症。RNAi同样也是一项潜力巨大的基因工程技术。相比较传统的基因敲除、转基因以及突变技术，RNAi更加简易可行，并可用于较大规模的基因功能分析，对于基因工程的实验技术发展有着潜在的巨大推动力。II Dicer酶2001年，Bernstein从果蝇体内分离出一种能够特异性地切割dsRNA的多蛋白核糖核酸酶，并命名为Dicer（DCR）。Bernstein发现一种CG4792酶（Dicer-1）可