基因拷贝数及甲醇浓度对重组毕赤酵母产华根霉脂肪酶的影响.pdfVIP

微 生物学通报 MAR20，2011，38(3)：301-309 M icrobiologyChina ◎ 2011byInstituteofM icrobiology．CAS tongbao@im．ac．cn 基因拷贝数和 甲醇浓度对重组毕赤酵母产 华根霉脂肪酶的影响 李飞 喻晓蔚 沙冲 徐岩 (江南大学生物工程学 院 教育部工业生物技术重点实验室 江苏 无锡 214122) 摘 要：将华根霉脂肪酶基 因克隆到 甲基营养型毕赤酵母 中表达，以甲醇利用快型菌株为宿主， 在 7L发酵罐水平对脂肪酶基 因拷 贝数分别为3、5、6的3株基 因重组菌一 xYRCL一3、XYRCL．5、 XYRCL．6进行高密度发酵调控 ，同时研究了甲醇浓度对表达华根霉脂肪酶的影响。结果表明， XYRCL．5在相 同条件下发酵产酶能力高于 XYRCL．6和 XY RCL一3，最适 甲醇诱导浓度控制在 0．1％士0．02％时，酶活可达到 12500U／mL，菌体干重达到204g／L，蛋白浓度也能达到 8．02g／L。 关键词：基 因拷 贝数，甲醇诱导浓度，毕赤酵母，华根霉脂肪酶 Impactofgenedosageandmethanolconcentrationon n T ‘ ■ ‘ ‘ 1 ‘ … 1 · ● ● lZopus ，zlnenstsrecOm binantliDaseDrocluction in LIFei YU Xiao．W ei SHA Chong XU 5(an ‘ (KeyLaboratoryofIndustrialBiotechnology，MinistryofEducation，SchoolofBiotechnology，JiangnanUniversity，Wuxi， Jiangsu214122，China) Abstract：TheRhizopuschinensislipasegeneswasclonedandexpressedinMutmethy1otrophic Pichiapastoriswith differentgenedosage．Thehigh。density fermentationoftherecombinantPichia pastorwithgenedosageofthree(XYRCL-3)，five(xvRCL一5)andsix(XYRCL一6)wasinvestigated on7一literfermenter．TheimpactofmethanolcOncentratiOnonRhizopuschinensis1ipaseexpressionwas alsoexplored．OurresultsindicatedthatmoreRhizopuschinensis1ipasewasproduced inXY RCL．5 producedthanthatofXY RCL．6andXY RCL-3underthesameconditions．Whenmethanolconcentra— tionwascontrolledat0．10％i0．02％．theenzym eactivityofRhizopuschinensislipaseproducedbyXY RCL一5couldachieve12500U ／mL．andthedryweightofXY RCL．5andproteinconcentrationcould reach204g／Land8．02g／L，respectively． 基金项 目：国家 863计划重点项 目(No．2010AA101501，2008AA10Z304)；国家 自然科学基金项 目(No