应用植物酯酶测定农药残留研究进展课件.pdfVIP

长江大学学报 (自然科学版) 2009年9月第6卷第3期：农学 · 6O · JournalofYangtzeUniversity(NatSciEdit) Sep．2009，Vo1．6No．3：AgriSci doi：10．3969／j．issn．1673—1409(S)．2009．03．019 应用植物酯酶测定农药残留研究进展 韩 波 ，姚安庆 ，王 勇，李俊凯 (长江大学农学院，湖北荆州434025) [摘要]植物酯酶主要用于有机磷和氨基 甲酸酯类农药残留的检测。对有机磷、氨基 甲酸酯类农药的植物酯 酶检测原理、应用条件、固定化研究现状和检测方 法作 一概述 ，以展望其广 阔的市场远景。 [关键词]植物酯酶；农药残留；有机磷；氨基 甲酸酯 [中图分类号]X839．2 [文献标识码]A [文章编号]1673—1409f2009)03一SO60—06 农药的不合理使用 ，导致农药在环境以及食物中的残留量严重超标 ，由此引起的农药中毒现象和农产 品贸易中引发的争端时有发生，因此发展可靠、灵敏、快速、实用的农药残留快速检测分析技术无疑是监测 和控制残留、保证农产品安全和避免 国际贸易争端的重要前提_1。传统的农药残留检测方法存在选择性 差、灵敏度低等缺陷；近年来发展较快的仪器分析方法具有灵敏度极高、选择性好 、分析迅速、适于微量、超 痕量组分的测定等特点 ，能有效准确地测定样品中农药残留含量 ，但往往需要昂贵的仪器和专业的操作人 员 ，费时费力，且不适合现场实时检测l_2；而快速的基于酶抑制原理的检测技术_3势将成为食品生产或产 品销售时农药残留检测及控制的重点研究对象 。 目前在农药残留检测过程中所用酯酶包括来 自动物体内的如从果蝇或 电鳗中l4提取的乙酰胆碱酯 酶 、马血清中得到的丁酰胆碱酯酶以及从小麦、水稻 、玉米、毛豆、黄豆、蚕豆、小白菜L5 等植物中提取的 植物酯酶 ；但胆碱脂酶来源于动物体Es]，价格贵且保存较为困难 ；而植物酯酶来源广、成本低、易于保存 ； 因此近年来有研究用植物水解酶替代乙酰胆碱酯酶的分析方法 。‘“]，结果发现在酶活性和抑制程度上有 些植物酶与动物酶相比并不逊色_1。 ，且其测定农药残留的最低检出限远低于国家规定的最大允许残留 量 (MRL)[14 ，因此用植物酶进行抑制反应的检测完全可行 。 1 植物酯酶检测农药残留的原理 植物酯酶抑制法是通过酶与食品中含有的农药反应后 ，底物与显色剂反应 的比色原理测定食品中农 药残 留量。这种方法具有灵敏度高、结果可靠 、测量时间短、且检测体系容易实现等特点。基于其比色原 理 ，有可能实现的测定方法有固蓝B盐法、靛酚 乙酯法等 。 1．1 植物酯酶固蓝 B盐法检测的原理 固蓝 B盐法的依据是农药能抑制植物酶的活性 ，而酶被抑制的程度可以用 比色法来测定。当酶与试 样进行反应时，如果试样中没有农药残留或者残 留量极小 ，酶的活性不被抑制 ，基质可以水解，水解产物通 过显色剂显色 ；反之 ，如果农药残留量较高 ，酶 的活性就会被农药所抑制 ，水解产物减少或者没有产物生 成 ，不能显色或显色较浅。该方法的显色反应原理如下l】： 乙酸一 一萘酯+水__垄堕 乙酸+ ～萘酚 a一萘酚+固蓝 B盐— 紫红色偶氮化合物+氯化锌十盐酸 植物酯酶可以使乙酸一a一萘酯酶水解为萘酚和乙酸，萘酚与显色剂 固蓝 B盐作用形成紫红色偶氮 化合物，从而完成显色反应。酶被抑制的程度不同，紫红色偶氮化合物的产量不同，溶液颜色的深浅也不 [收稿 日期32009—02—14 [第一作者简介]韩 波(1984一)，男，湖北十堰人，硕士研究生，主要从事农药残留与分析研究 [通讯作者]姚安庆 ，Email：yaq990@126．COIn． 第 6卷 第 3期 ：农学 韩 波等 ：应用植物酯酶测定农药残留研究进展 同。依据该原理可以衡量出植物酯酶的比活力，比较受农药抑制时的酶活性和未受农药抑制时的酶活性 ， 可以求出农药 的抑制率 。与乙酰胆碱酯酶相似，可以通过农药残留量与酶活性抑制率之间的关系，测定抑 制率的大小来显示农药残留的毒性程度 。 1．2 植物酯酶2。6一二氯靛酚乙酯法检测的原理 在 pH7．o～8．0的溶液中，碘化硫代乙酰胆碱被植物酯酶水解 ，生成硫代胆碱。硫代胆碱具有还原 性 ，能使蓝色的2，6一二氯