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中国科学: 生命科学 2011 年 第41 卷 第10 期: 1030 ~ 1036 SCIENTIA SINICA Vitae SCIENCE CHINA PRESS 论 文 一种来源于脆弱类杆菌的-半乳糖苷酶的理化 性质及其酶解B 型红细胞的工艺研究 * * 高红伟, 李素波, 鲍国强, 檀英霞, 王颖丽, 章扬培, 季守平 , 宫锋 军事医学科学院野战输血研究所, 北京 100850 * 联系人, E-mail: jishouping@; gongfeng@ 收稿日期: 2011-07-16; 接受日期: 2011-08-23 国家自然科学基金(批准号:资助项目 doi: 10.1360/052011-607 摘要 利用-半乳糖苷酶去除红细胞表面的B 抗原是制备通用O 型红细胞的有效方法. 本 关键词 文在克隆表达纯化脆弱类杆菌来源的α-半乳糖苷酶的基础上对其理化性质进行了研究, 该酶 基因重组- 半乳糖苷酶 的分子量为 64908 Da, 等电点在7.12~7.30 之间, 最适温度为41 ℃, 最适pH 为5.6~6.0, 其理 脆弱类杆菌 化性质适合用于B 型红细胞的血型改造; 为了确定高效、快速、温和的酶解条件, 本文对酶 理化性质 解 B 型红细胞的工艺进行了优化. 通过研究缓冲液对酶与红细胞结合的影响, 确定了最佳酶 血型改造 解缓冲液为250 mmol/L 甘氨酸和3 mmol/L NaCl, pH 6.8; 酶解的最适红细胞压积为40%, 酶 解温度为26 ℃, 酶解时间为1 h. 利用优化的酶解工艺获得的B-ECORBCs 形态及结构功能指 标均正常, 流式细胞结果证明其 B 抗原和 H 抗原标记率与 O 型红细胞相当, 说明制备 B-ECORBCs 的工艺已成熟. 这种工艺具有酶用量少、酶解条件温和、制备过程简单和时间短 等优势, 具有很好的临床应用前景. 因血型鉴定、识别错误等引起的错误输血严重威 B, AB 型红细胞转变成通用 O 型红细胞, 将提高红细 胁受血者的健康[1~3]. 输注通用 O 型红细胞是避免血 胞的利用率. 本课题组曾经制备了重组中国海南咖 型错配引起的输血事故的有效方法. 无论是在突发 啡豆 α-半乳糖苷酶, 应用于通用 O 型红细胞的制备, 事件中还是平时, 输注通用 O 型红细胞不仅可以防 但酶解红细胞需要的酶剂量太大且酶解的环境为酸 止血型不符所造成的输血事故, 而且不需配型、为救 性(pH 5.6), 对红细胞有一定影响, 酶解前后都需要 治患者赢得宝贵的时间, 同时, 还大大节省了血型鉴 调整pH 值, 使整个血型改造工艺较复杂[4~6]. 为解决 定的费用, 避免由于血液偏型而导致的血液浪费, 简 上述问题, 2009 年本课题组从原核生物脆弱类杆菌中 化血液采集、储存和配型程序, 提高工作效率. 可见, 克隆了新型 -半乳糖苷酶基因, 并实现了可溶性表 制备通用型红细胞对战争和突发事件中的应急输血 达, 初步实验证明, 该酶可在pH 6.8 的环境下将B 型 乃至临床输血均是一场