4血红蛋白与意义.pptVIP

* * 1.了解血红蛋白的结构及种类。 2.掌握氰化高铁血红蛋白测定法测定 血红蛋白。 3.掌握血红蛋白测定的参考值。 4.掌握红细胞计数和血红蛋白测定的 临床意义。 5.了解血红蛋白测定的其它几种方法。 亚铁血红素 亚铁血红素 珠蛋白 亚铁血红素 亚铁血红素 （原卟啉、Fe2+） （原卟啉、Fe2+） （原卟啉、Fe2+） （原卟啉、Fe2+） （Hemoglobin，Hb或HGB） 珠Pr N N Fe N N （O2） 亚铁血红素结构示意图 HbA： α2β2 成人占90%以上 HbA2： α2δ2 成人约占2～3% HbF(胎儿Hb)：α2γ2 成人2%以下 HbO2(氧合血红蛋白) Hbred(还原血红蛋白) HbCO(碳氧血红蛋白) Hi (高铁血红蛋白) SHb(硫化血红蛋白) 主要成分 少量 与氧结合 空着 与CO结合 Fe2＋→Fe3＋ 与S结合 氰化高铁血红蛋白测定法（HiCN法） 碱羟高铁血红素法（AHD575法） 十二烷基硫酸钠血红蛋白法(SDS-Hb法) 沙利(Sahli)法 (县及县以上医院已淘汰) 一. 原理 Hb ＋CN－ 氧化 HiCN为棕红色，最大吸收峰540nm。根据标本的吸光度可知Hb浓度。 HiCN Hi (HiCN法) 注：硫化血红蛋白(SHb)不能被转化 氰化钾 0.05g 高铁氰化钾 0.2g 磷酸二氢钾 0.14g 非离子表面活性剂 1.0ml 蒸馏水 加至1000ml 二. 试剂 HiCN转化液(文齐液) 调pH7.0～7.4，置棕色玻璃瓶中密封保存。 氧化 调节pH 促溶,防混浊 (HiCN法) 提供CN- 三. 方法 4.实际工作中，可用HiCN参考液，按生化方 法绘制标准曲线，或求出K值后计算。 K＝∑Hb（g）/∑A 1. 5.0 ml Hb转化液＋血20ul,混匀,静置5min。 2.分光光度计比色，波长540nm，以空白转化 液调零，测定吸光度“A”。 3.如用符合WHO标准的光度计，则可据“A”直 接计算Hb浓度。 Hb(g/L)＝A540 /44000×64458×251＝A×367.7 Hb(g/L) A 50 0.128 100 0.265 150 0.385 200 0.523 K=∑Hb/∑A = 500/1.301 = 384.32 Hb=K A 1.KCN为剧毒药品，防污染。 2.Hb转化液不能存于塑料瓶中。 否则CN-下降，结果偏低。 3.分光光度计应校正后使用。 4.标准曲线或K值应定期校正。 四. 注意事项 HiCN法 SDS-Hb法 优点：操作简单；结果稳定。 缺点：氰化钾有剧毒； 高白细胞或高球蛋白血症可致浑浊； HbCO转化较慢。 推荐方法 优点：操作简单；结果稳定；无公害。 缺点：摩尔消光系数未确定； SDS本身质量差异较大； 破坏白细胞。 次选方法 如何采用SDS-Hb法进行血红蛋白测定？ 1.HiCN法标准曲线绘制 2.SDS-Hb法标准工作曲线绘制 1)取4份不同浓度抗凝血或溶血液用HiCN 法测定吸光度，并求出其Hb浓度。 2)再用SDS-Hb法测定4份标本的吸光度。 3)以4份标本Hb浓度为横坐标，SDS-Hb法测得 的吸光度为纵坐标，绘制标准工作曲线。 3.SDS-Hb法测定待测标本 成男： 120～160g/L 成女： 110～150g/L 新生儿：170～200g/L 一. 年龄与性别的差异 二. 精神因素 激动、恐惧、冷水浴使↑ 三. 剧烈体力运动和劳动 缺氧，使↑ 四. 气压降低 缺氧，使↑ 五. 妊娠中、后期 血液稀释，使↓ 6个月～2岁婴幼儿 造血原料不足，使↓ 某些老人 造血功能减退，使↓ 新生儿 母体内相对缺氧，使↑