家蚕二分浓核病毒感染家蚕后的释放动态研究.PDFVIP

微生物学通报 Feb. 20, 2017, 44(2): 489−494 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160108 生物实验室 家蚕二分浓核病毒感染家蚕后的释放动态研究 * 胡朝阳 张晓龙 张清 刘伟 李国辉 姚勤 ( 212013) 摘 要：【目的】研究家蚕二分浓核病毒(BmBDV)感染家蚕后不同时间段内释放到环境中的病毒 量，为通过蚕沙快速检测病毒提供方法和依据。【方法】选取家蚕二分浓核病毒基因组节段VD1 上的ns1 基因和VD2 上的ns3 基因中的一小部分片段，分别克隆到pMD18-T 载体上，制备标准 品质粒，并用实时荧光定量PCR 的方法绘制ns1 和ns3 的标准曲线。通过检测BmBDV 感染5 龄 家蚕后不同时间蚕沙中的病毒量来衡量释放到环境中的病毒的变化动态。【结果】在病毒感染家蚕 6 5 第3 天，大量的病毒随蚕沙释放到环境中，每微克蚕沙中约含1.38×10 个VD1 ，6.54×10 个VD2； 从感染后第5 天开始，释放到环境中的病毒量呈指数型增加；第7−8 天病毒的释放量到达一个平 7 7 台期，此时每微克蚕沙中约有2.12×10 个VD1 ，1.34×10 个VD2 。普通PCR 结果也反应出了类 似的病毒释放动态。【结论】根据BmBDV 感染家蚕后的释放动态，推测病毒的复制周期约60 h。 利用实时荧光定量PCR 检测蚕沙中的BmBDV ，能简单、快速、准确地诊断病毒的感染。 关键词：家蚕二分浓核病毒，蚕沙，实时荧光定量PCR ，病毒释放动态，复制周期 Release dynamics of Bombyx mori bidensovirus from virus-infected silkworm * HU Zhao-Yang ZHANG Xiao-Long ZHANG Qing LIU Wei LI Guo-Hui YAO Qin (Institute of Life Sciences, Jiangsu University, Zhenjiang, Jiangsu 212013, China) Abstract: [Objective] In order to investigate the amount of virus released from silkworm infected by Bombyx mori bidensovirus (BmBDV) at the different periods and to develop a method for rapid and accurate detection whether silkworm were infected by BmBDV or not. [Methods] A small fragment of ns1 gene of genomic segment VD1 and ns3 gene of VD2 were cl