雅致枝霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆与在酿酒酵母中的表达.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # ! ’ ( 年 月 日 $%% $ ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! )*+,-.,/ $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! ! 雅致枝霉 脂肪酸脱氢酶基因的克隆 ! 及在酿酒酵母中的表达 王德培，李明春，魏东盛，张颖慧，邢来君 （南开大学微生物系 天津市微生物功能基因组学重点实验室 天津 0%%%#） 摘 要：根据真菌 脂肪酸脱氢酶基因保守的组氨酸 区和 区附近保守序列设计兼并引物进行 ，得到 !5 # D35EFD 雅致枝霉（ ） 脂肪酸脱氢酶基因 部分 序列，然后通过快速扩增 末端 !#$%’($ )*)+#%, GB0 H$1%!5 !2(+I @JKG @JKG 技术（ ）向两端延伸得到 的 脂肪酸脱氢酶基因全长 序列。序列分析表明有一个 、编码 DGF7 #2%!+I !5 @JKG #0+I 个氨基酸的开放阅读框 。推测的氨基酸序列与已知其他真菌的 脂肪酸脱氢酶基因的氨基酸序列比 !2( 37J !5 对，具有 个组氨酸保守区、个疏水区及 末端细胞色素 融合区。将此编码区序列亚克隆到酿酒酵母缺陷型 0 $ K +2 菌株LKMN@# 的表达载体 IO7N$ H% 中，构建表达载体 IO37J，并在酿酒酵母 LKMN@# 中异源表达。通过气相色谱 （ ）和气相色谱 质谱（ ）分析表明，该序列在酿酒酵母中获得表达，产生 亚麻酸（ ）的含量占酵母总脂 PF Q PF5RN 5 PSG $ 肪酸的 。证明此序列编码的蛋白能将外加的亚油酸转化为 亚麻酸，是一个新的有功能的 脂肪酸脱氢酶