基因芯片快速检测分枝杆菌技术辅助诊断小儿结核病临床研究.docVIP

基因芯片快速检测分枝杆菌技术辅助诊断小儿结核病的临床研究 　　[摘要] 目的 探讨基因芯片快速检测分枝杆菌技术在辅助诊断小儿结核病方面的临床研究。方法 方便选取2014年7月―2015年7月住于该院的经临床、放射线疑诊0～14岁肺结核77例为观察对象，采用晶芯@结核病分子诊断系统对观察对象痰标本进行检测，将检测结果与最终诊断相比较，并与罗氏痰培养结核菌法、痰涂片找结核菌、DNA检测、PPD试验、结核抗体、对INH＼RFP耐药性及对非结核分枝杆菌菌种鉴定结果进行对比，分别计算各检测方法的灵敏度和特异度，从而判断基因芯片技术在诊断儿童结核病可行性、敏感、快速。结果 重症结核感染17例，其中有9例（11.69%）为血行播散型肺结核，7例（9.09%）合并有结核性脑膜炎，1例（1.3%）合并骨结核。检测异烟肼耐药相关基因，基因芯片法和罗氏培养法比较χ2 =2.286，P=0.515，Kappa=0.604，检测利福平耐药相关基因，基因芯片法和罗氏培养法比较χ2 =58.77，P 　　据2014年8月国家结核病预防控制中心与国际防痨与肺部疾病联合会召开的会议，WHO人员预计我国儿童结核病的患者例数应占总人口患者例数的6%[1]。多个地区的调查结果也显示儿童耐药结核病发病率有所升高。然而由于儿童结核病痰涂片率及阳性率低，这些都给儿童结核病的诊断带来更大困难。儿童结核病的漏诊和误诊较高，在临床工作中，高灵敏度、高特异性、耗时短的检测技术能带来更大的便利。众所周知，各种结核杆菌的耐药均由于基因突变或基因转化，该研究采用晶芯@结核病分子诊断系统完成于2014年7月―2015年7月住于该院77例疑似结核病儿童的痰标本进行检测，其结果与最终诊断相比较，并与PPD试验、结核DNA、痰涂片、痰培养结核菌检测结果进行对比，分别计算各检测方法在诊断结核病及判断异烟肼和利福平耐药情况的灵敏度和特异度，同时计算出检测非结核分枝杆菌的灵敏度和漏诊率，从而判断基因芯片技术在诊断儿童结核病是否有更可靠、敏感、快速的意义，现报道如下 1 资料与方法 1.1 一般资料 方便选取入住于福州肺科医院疑似肺结核儿童77例，年龄0～14岁，其中男童41例，女童36例，该研究经福州肺科医院伦理委员会同意，所有入组患儿均取得患儿家属知情同意 1.2 疑似临床结核病判断指标 临床上均有咳嗽、发热2周以上，同时具有下列一项：①结核中毒症状或结核病接触史；②胸片显示肺结核征象；③结核菌纯蛋白衍生物（PPD）试验48～72 h直径≥10 mm。排除近期抗结核治疗超过1个月者 1.3 标本采集 入院后24 h内完成对标本采集，对3岁以下无法自行吐痰者，均于晨起空腹拍背10 min后，吸引器接痰杯负压吸引法留取痰标本5 mL，3岁及3岁以上儿童鼓励患儿漱口后自行咳痰5 mL，分别检测痰涂片找结核菌、痰结核DNA、痰培养结核菌（罗氏培养法）、基因芯片技术检测。所有患儿入院24 h内均行PPD试验，72 h判读结果。其余与诊断相关的检查如生化、胸片、肺部CT等按照诊断标准所需进行检查 1.4 基因芯片技术检测 该院检验科对收集的痰标本24 h内进行基因芯片技术检测，过程包括：样品制备、芯片反应与洗干、结果判读，整个过程不超过24 h，所有操作流程均严格按照仪器使用说明书进行。所有仪器均由博奥生物有限公司生产 1.4.1 样品制备 3 h内可以鉴定结核与非结核分枝杆菌，6 h鉴定非结核分枝杆菌类型，及判断异烟肼及利福平的耐药情况。将消化液（10 mL 4%碳酸氢钠、10 mL 2.94%柠檬酸三钠、0.1 g N-乙酰-L-半胱氨酸）预处理好的痰标本放入晶芯ExtractorTM核酸快速提取仪中提取核酸，再将提取的核酸加入基因扩增仪中进行扩增，并在4℃保存 1.4.2 芯片反应与洗干 基因扩增产物经变性后加入到结核分枝杆菌耐药检测试剂盒的芯片点阵中，然后放入晶芯Biomixer芯片杂交仪进行芯片反应。再将完成杂交的芯片放入晶芯Slide WasherTM芯片洗干仪中进行洗干 1.4.3 结果判读 将洗干的芯片载入晶芯LuxScan10K-B微阵列芯片扫描仪中，自动进行结果判读 1.5 统计方法 用SPSS 18.0统计学软件进行数据分析，利用传统罗氏培养菌和药敏试验的检测结果作为金标准对基因芯片技术的检测结果进行比对，计算基因芯片法的灵敏度、特异度和符合率，用χ2 检验和Kappa检验分析药敏实验与基因芯片结果的一致性；另外计算痰涂片找结核菌、PPD试验、血结核抗体、痰结核DNA的阳性率，与基因芯片法的阳性率应用χ2 检验相比较，以P0.05，说明两种方法差异无统计学意义；而对于检测利福平耐药方面，基因芯片法和罗氏培养法卡方检验P