皮肤成纤维细胞构建组织工程化猪角膜基质样组织教案.pdfVIP

维普资讯 上 海 交 通 大 学 学 报 (医 学 版 ) - l56 · JournalofShanghaiJiaotongUniversity(MedicalScience) Vo1．27No·2Feb·2007 文章编号 ： 0258—5898(2007)02—0156—05 · 基础研 究 · 皮肤成纤维细胞构建组织工程化猪角膜基质样组织 张艳青 -一， 张文杰 -一， 胡晓洁 ， 周广东 ， 崔 磊 ， 刘 伟 ， 曹谊林 (上海交通大学 医学院 1．第九人 民医院整复外科 上海市组织工程重点实验室，上海 200011；2．上海市组织工程研究与开 发中心 。上海 200235) 摘 要 ： 目的 探讨以皮肤成纤维细胞为种子细胞 ，在猪角膜微环境 中构建组织工程化角膜基质组织的可行性 。方法 分离获 取胎猪皮肤成纤维细胞经体外培养、扩增。通过转染绿色荧光蛋白(GFP)基 因标记细胞 ，示踪细胞 的转归。选取第 3代的细胞 接种于可吸收生物材料聚羟基 乙酸 (PGA)，形成细胞 一生物材料复合物 ，体外培养 1周后 ，移植于猪 的角膜基质层 内，于第 8周 取材进行大体 、组织学检查及超微结构观察 。以角膜基质细胞为种子细胞构建的组织工程化角膜基质组织作为对照。结幂 术 后 8周 ，实验组角膜逐渐恢复透 明，与对照组角膜无 明显差别 。组织学检查显示形成新生的角膜基质样组织 ，呈板层状 ，排列较 规则 ，与对 照组角膜组织相似。超微结构观察及胶原纤维直径检测显示 ，实验组与对照组角膜组织差异无统计学意义 。荧光显 微镜观察到 GFP阳性细胞存在 。结论 皮肤成纤维细胞可能替代角膜基质细胞 ，在猪角膜 内构建角膜基质样组织 。 关键词 ：组织工程 ； 角膜基质 ； 皮肤成纤维细胞 中图分类号 ：Q813 文献标志码 ：A Constructionoftissueengineered porcinecornealstroma with skinfibroblasts ZHANGYan—qing一，ZHANGWen-jie一，HUXiao-jie一，ZHOUGuang—dong一，CUILei一，LIUWei一，CAOYi—lin’ (．DepartmentofPlasticReconstructiveSurgery，ShanghaiKeyLaboratoryofTissueEngineering，TheNinthPeople’SHospital。School ofMedicine，ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai 200011，China；2．ShanghaiTsisueEngineeringResearchandDevelopment Center，Shanghai 200235。China) Abstract： Objective Toexplorethefeasibilityofconstructingtissueengineeredporcinecornealstromawithskinfibroblastsinvivo． M ethods Skinfibroblastswereisolatedfrom embryonicporcine。culturedand expandedin vitro．Cellswere labeledwithgreen fluores— cenceprotein(GFP)genebyretro—viralinfection．Cellsatpassage3wereseededonpolyglycolicacid(PGA)non—wovenfiberstoform a cell—scaffoldcomplex．Thecomplexeswerethenimplanted intoporcines’cornealstromaafterculturingin vitro for1week．Engineered stromawasobservedcontinuouslyandharvestedafter8 weeksofrgrossandhistologicalevaluation．PGA w