酵母菌种群数量的测定课件.ppt

酵母菌数量的测定 显微镜直接计数法：使用血球计数板等计菌器进行酵母菌的计数。 优点：直观、快速、操作简单。 缺点：所测得的结果是死菌体与活菌体的总和。 取样前需摇匀 向计数室添加样品向计数室加样品时，先将计数室盖上盖玻片，用无菌细滴管沿盖玻片边缘滴入少量菌液，菌液自行沿边缘缝隙渗入计数室。计数室要充满菌液，不能存有气泡。 取样与滴加培养液 稀 释 小方格内酵母菌数量过多，难以计数，就要对菌液进行适当稀释后再计数。一般样品稀释后适宜范围是少于 10 个菌体/每小格。根据需稀释的倍数，精确算出应加入的无菌水量， 如lmL 菌液欲稀释100 倍，则需向lmL 菌液中加入99mL 无菌水，而不是加入100mL 无菌水。 计 数 对于压在小方格界线上的酵母菌应取相邻两边及顶角计数。 以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数： (6)怎样进行酵母菌的计数? 染 色 美蓝是无毒性染料，碱性条件下，用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。 如果将染液直接滴在血球计数板上，菌液浓度改变，无法对实验结果精确计算。 正确的做法应是另外制作装片，通过染色对活菌和死菌加以区分，算出两者比例，进一步换算出总菌体数中的活菌数。 第 7 天 死亡 (1)在不同温度（以及通氧、通CO2等）条件下酵母菌种群数量增长的情况如何？ (2)不同培养液（如加糖和不加糖）中酵母菌种群数量增长的情况如何？ 进一步探究： 试管编号 培养液/mL 无菌水/mL 酵母菌母液/mL 温度/℃ A 10 — 0.1 28 B 10 — 0.1 5 C — 10 0.1 28 试管编号 培养液/mL 无菌水/mL 酵母菌母液/mL 温度/℃ A 10 — 0.1 28 B 10 — 0.1 5 C — 10 0.1 28 为什么第3天后A组培养液中酵母菌数目减缓甚至不增加？ C 血球计数板的清洗 血球计数板使用结束后，应用清水浸泡、冲洗，不能用刷子等硬物洗刷，自然晾干或吹风机吹干后，镜检每个小格中是否存有污物、残菌，如不清洁，需重新清洗直至洁净。 无菌操作 要防止杂菌污染给实验结果带来影响。每次抽样检测用到的蒸馏水、玻璃器皿、滴管等要事先经无菌化处理，血球计数板、载玻片、盖玻片等必需保持洁净。 每次取样观察要规范，实验用过的器材要清洗干净，需灭菌的器具则一定要灭菌。