不同原理的PCR方法用于地中海贫血产前诊断的验证应用.pdf

实用医学杂志2017年第33卷第 6期 不同原理的PCR方法用于地中海贫血产前诊断的 验证应用 肖奇志 王格 李恋湘 李磊 谢建红 周玉球 摘要 目的：评估两种不同技术原理的PCR方法用于地 中海贫血 (下称 “地贫”)产前诊断的必要性和 可行性。方法 ：采用双盲法，对509份产前诊 断标本分别采用单管多重PCR法 (single—tubenmhiplexPCR， STMP)+反向点杂交法 (reversedotblot，RDB)、探针熔解 曲线法 (probemeltingcurveassay，PMCA)检测常 见仅一地贫和B．地贫基因突变。两种方法所得结果不一致或少见类型地贫突变时 ，采用DNA测序分析法 确诊。所有产前诊断结果均进行验证或随访。结果 ：经STMP+RDB、PMCA检测 突变谱不同，o一【地贫和 B一地贫各有 1例结果不 同。另STMP+RDB检测灵敏度高于PMCA，其差异性在标本受母血污染时有提示 作用。结论 ：两种不同技术原理的PCR方法进行地贫产前诊 断，是必要和可行的，两者具有互补性 ，可确 保结果的可靠性和减少单一技术的缺陷。 关键词 地中海贫血 ； 多重PCR； 反 向点杂交； 探针熔解 曲线； 产前诊断 Verification application ofPCR techniqueswith differentprinciplesin prenataldiagnosisofthalassemia XIAOQizhi，WANGGe ，LILianxiang，LILei，XIEJianhong，ZHOUYuqiu．DepartmentofClinicalLaboratory， ZhuhaiMunicipalMaternityandChildHealthcareHospitalZhuhaiInstituteofMedicalGenetics，Zhuhai519001， China A【bstract】 objective ToevaluatethenecessityandfeasibilitybyusingtwodifferentPCR—based techniquesforprenataldiagnosisofthalassemia．M ethods 509 specimensforprenataldiagnosisofthalassemia weredetectedrespectivelybysingletubemultiplexPCR (STMP)，reversedotblot(RDB)orprobemehingcurve assay(PMCA)ofrcommond—thalassemiaorB—thalassemiamutationsindouble．blindtests．Sampleswithdifferent detection resultswereconfirmedwithDNA sequencinganalysis．Prenataldiagnosisofthalassemiaresultswere verifiedorfollowedupafterbirth．Results Indetecting ．thalassemiaandB—thalassemia，therewasonecasein STMP+ RDB andanothercasePMCA indicatingdifferentiatingresults．ThedetectionsensitivityofSTMP +RDB washigherthanthatofPMCA ．anditsdifferencecanbeusedasanindieationformaternalbloodcontamination． Conclusion ThetwoPCRmethodswithdifferentprincipleswerenecessaryandfeasibleofrtheprenataldiagnosis ofthalassemia．