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2010龙洞题 简答题（4分*6=24分） 1.简述细胞信号转导涉及的重要信号分子类型及其特点？（信号转导途径涉及的信号转导分子类型及特点？） a、第二信使 非蛋白信号分子;多数涉及G蛋白偶连受体的信号转导;重要的有：Camp、cGMP 、IP3、DAG、Ca+、PIP3 和 NO. b、蛋白激酶和蛋白磷酸化酶级联是最重要的细胞内信号传递系统 包括蛋白苏氨酸激酶;蛋白酪氨酸激酶; 对应的磷酸化酶 c、G蛋白 三聚体G蛋白 属于膜结合蛋白 由三个亚基构成 alpha亚基结合GTP活化后，可激活膜上的腺苷 酸活化酶等 小分子G蛋白 其中ras/rap蛋白在信号转导过程中的地位最为 重要. 答：信号转导途径涉及的信号转导分子组成主要包括受体和配体两种类型。他们特点如下：饱和性（受体数量有限）、特异性、可逆性（复合物形成和解离）、失敏现象（受体长期暴露于配体的环境中，反应性下降）和受体内化（受体长期暴露于配体中，受体-配体复合物进入胞质） 2. 为什么编码胰岛素的基因区域有40000碱基对，但最后胰岛素的两个亚基共有86个氨基酸(最后只翻译出90多个蛋白质？) 为什么编码胰岛素有40000碱基对，最后胰岛素有两个亚基，从基因转录，翻译及各自加工水平说明； 答：从胰岛素基因到最后翻译出90多个蛋白质这个过程，经历了转录和翻译两个过程。胰岛素DNA作为模板直接指导RNA分子合成的过程就是转录，在转录过程中，基因数目不变，但转录后的m RNA链是前体m RNA，在成为成熟m RNA之前，还需要进行一系列的外显子剪接，将内含子剪除，其中还有一些内含子能够自我剪除，这个过程之后就只剩下2-3%的成熟m RNA结构基因。成熟的m RNA由细胞核转移到核糖体进行表达，结构基因包括编码基因和非编码基因，编码基因在表达过程中还受一系列调控机制的作用，抑制蛋白质的表达。所以，，，，，，，，，。 3.简述PCR过程所涉及的成分及其在反应中的作用？ 答:①PCR反应的缓冲液: 由Tris-HCl构成缓冲液，其中KCl 促进引物的退火， 加入BSA或明胶有利于保护TaqDNA聚合酶活性，而必要时加入适量二甲基亚砜(DMSO)或甲酰胺利于破坏模板二级结构，可以提高PCR反应特异性。 ②、镁离子：浓度一般用量1.5-2.0 mmol/L，Taq DNA聚合酶活性需要Mg 2+。Mg 2+浓度还会影响引物的退火、模板与PCR产物的解链温度，从而影响扩增片段的产率。 ③、底物：工作浓度20-200umol/L， 4种dNTP必须以等摩尔浓度配制，以减少PCR反应 的错配误差并提高使用效率。 ④、Taq DNA聚合酶： 75-80℃时具有最高的聚合酶活性，150个核苷酸/秒。 ⑤、引物： 浓度为0.1-0.5umol/L。适当浓度的引物可以提高目的DNA片段产率。引物Tm值在55-80 ℃范围，退火温度较为理想。 4.简述重组DNA技术的基本过程。（DNA重组的流程？） 答：①目的基因的获取、 ②基因载体的选择与构建、 ③目的基因与载体的拼接、 ④重组DNA分子导入受体细胞、 ⑤重组DNA导入宿主细胞后需要进行筛选和鉴定。 5.分子杂交的基本形式有哪些？（2、核酸杂交的形式？ 答：核酸杂交：具有互补序列的两条单链核酸分子在一定的条件下（适宜的温度及离子强度等）碱基互补配对结合，重新形成双链；在这一过程中，核酸分子经历了变性和复性的变化，以及在复性过程中个分子间键的形成和断裂。杂交的双方是待测核酸和已知序列。杂交的方法包括：Southern 印迹法、Northern 印迹法、斑点印迹杂交、原位杂交、Western 印迹法和液相杂交。） 问答题（7分*2=14分） 对一个已知序列资料的基因，要求在哺乳类细胞中表达其蛋白质。写出目的基因的获得到表达检测的全过程，并对过程中涉及的重要问题做出必要的解释。 答：基因克隆的步骤： ㈠ 目的基因的获取。 1．化学合成法。 2．基因组DNA文库。 3．cDNA文库。 4．PCR㈡ 克隆载体的选择和构建。 ㈢ 外源基因和载体的连接。 1．粘性末端连接。 2．平端连接。 3．同聚物加尾连接。 4．人工街头连接。 ㈣ 重组DNA导入受体细胞。 ㈤目的基因序列的筛选与鉴定：①根据重组载体的标志作筛选 ② 、b-半乳糖苷酶显色反应选择法 ③用核酸杂交法进行筛选 ④ PCR法进行筛选 ⑤免疫学方法进行筛选 ⑥ DNA限制性内切酶图谱分析 ⑦核苷酸序列测定 ㈥ 克隆基因的表达 2.、试述RB基因在细胞周期进展中(调控过程中)的作用及机制。 答：RB基因是细胞周期调控及细胞分化中重要的调控因子。它通过与细胞内的调控元件，细胞蛋白相互作用来控制细胞生长和分化，同时它又受到细胞内、外多