刺参体腔细胞吞噬功能初步研究.pdf

刺参体腔细胞吞噬功能的初步研究 金晶宇 大连水产学院生命科学与技术学院，大连 (116023) E-mail：jy-kim@163.com 摘 要：本文从形态学方面对刺参的体腔细胞的组成、分类、数量进行了研究，并对其吞噬 作用及吞噬发光的产生进行了研究。刺参体腔细胞从形态上可分为三种：无颗粒、颗粒、桑 椹状细胞，前两种细胞中都具吞噬作用。利用鲁米诺化学发光法能很好的测定吞噬强度。 关键词：刺参，体腔细胞，吞噬发光，鲁米诺化学发光 1. 引言 由于无脊椎动物不存在特异性免疫系统，不能像脊椎动物那样发展一套比较完善的免疫 机制，体内主要以非特异性免疫因子为主，尤其是血细胞的吞噬功能等组成了抵御细菌、病 毒侵入的坚固防线。血细胞既是免疫细胞的担当者又是体液免疫的提供者，而血淋巴是多种 细胞和体液免疫因子，它们互相协同对异物产生凝集作用、黑化作用、溶解杀菌、吞噬等免 疫反应是低等无脊椎动物体内抵御外来病原生物侵害的主要“屏障”[1] 。其中，血细胞的吞噬 作用是最主要的免疫功能。在研究无脊椎动物血细胞免疫活性时，除了直接检测其吞噬能力， 还可以通过检测活性氧水平来间接反映。低等无脊椎动物细胞吞噬时有典型的呼吸爆发现象 并产生活性氧，有超氧阴离子（O - 1 [2] ）、过氧化氢(H O ) 、羟自由基(OH·)、和单线态氧( O ) 。 2 2 2 2 活性氧有很强的杀菌功能，可以单独或同溶酶体酶等结合，抵御外源病原微生物的入侵，活 性氧产生的强弱间接反映了血细胞杀菌机能的强弱。 1972 年Allen 首先发现吞噬细胞在吞噬过程中产生化学发光的现象，并用液体闪烁计数 仪侦测到这种光。这种方法已经广泛应用于无脊椎动物防御体系的研究[3] 。目前，最常用的 探针是鲁米诺。它能与活性氧反应产生强烈的化学发光信号，对吞噬细胞的吞噬发光是一种 放大作用，CL 法已成功的应用于：美洲巨蛎[4] [5] [6] 、长巨牡蛎、食用牡蛎 、大扇贝 和 Geukensiademissa[7] [8] 等。在国内对皱纹盘鲍进行诱导，并发现有呼吸爆发和活性氧的产生 。 棘皮动物体内执行免疫功能的是体腔中的一些循环细胞,即体腔细胞。在这些细胞中变 形细胞在抵御非己物质中最为活跃参与包被反应、确保非己物质被吞噬和破坏，并且通过产 生活性氧执行毒杀作用。活性氧被一种膜介导NADPH 酶激活转变为负氧离子，这种游离的 自由基能形成更大毒性的物质如过氧化氢等。G.Coteur 等在进行环境因子对欧洲海星的免疫 应答影响的实验中，发现低温低盐及细菌诱导都能使细胞的ROS 增大，而温度成为月ROS 变化的主要影响因子[9] 。 本文对刺参的各类体腔细胞免疫功能作初步的探索，为进一步研究海参病害、挑选合适 的免疫增强剂奠定基础。 2. 实验材料与方法 2.1 实验材料 2.1.1 刺参 取自旅顺渤海刺参，大约2 龄左右，暂养于大连水产学院海养楼。 2.1.2 无菌海水 海水取自大连水产学院海养楼，用0.45um 醋酸纤维滤膜抽滤后高压灭菌。 -1- 2.1.3 吞噬用酵母悬液 称取20mg 食用干酵母，加入无菌海水离心后倒掉上清液，加入海水重悬，再离心一次， 加入刺参自体体腔上清液调理2 小时以上(