蛋白质组学技术筛选及鉴定癫痫疾病的差异蛋白质.pdf

V01．3l 高等学校化学学报 No．10 2010年lO月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNⅣERSmES 1970—1975 蛋白质组学技术筛选与鉴定 癫痫疾病的差异蛋白质 孙志岭1，高觉民2，许志洋3，王铮4，王富强3 (1．南京中医药大学护理学院，南京2l0046；2．南京中医药大学附属医院神经外科，南京210029； 3．南京医科大学大型仪器中心，南京210029；4．江苏广播电视大学城市科学系，南京210017) 摘要应用蛋白质组学双向凝胶电泳(7rwo—dimemionalgelelectr叩hor陷is，2DE)和质谱技术，定量分析和鉴 定了癫痫组(n=3)和正常组(n=3)脑组织的差异表达蛋白，以从蛋白质水平上揭示癫痫病的发生机制．结 果表明，凝胶图谱可辨识2500—3000个蛋白点，对21个显著差异表达蛋白点进行质谱鉴定和SwissPmt数据 库检索，得到17个癫痫差异蛋白，其中2个蛋白在癫痫组织中表达上调，15个蛋白表达下调．部分蛋白与 癫痫的关系属首次报道．这些蛋白与癫痫的病变相关，可能成为癫痫的分子标志物和药物治疗的靶向蛋白． 关键词癫痫；双向凝胶电泳；质谱；蛋白质组学 中图分类号R742．1 文献标识码A 文章编号0251奶90(20lOJ10．1970JD6 癫痫是临床上最常见的神经系统疾病之一，在我国约有900万人患癫痫，其中约600万人每年都 有发作，且约1／3患者对抗癫痫药物治疗不敏感．由于对癫痫发病机制尚不清楚，因而缺乏针对性治 疗手段．此外，由于癫痫发作具有多样性、不定时性和短暂性，临床诊断易与各种非癫痫发作性疾病 相混淆．目前采用的常规脑电图描记时间短，阳性率低．动态脑电图虽然可提高阳性率，但假阳性率 高，且监测时间长，费用高．同时脑电图无法反应癫痫致病机制，不能为治疗及药物开发提供靶点．因 此，对癫痫患者发病机制及生物标志物的研究有利于其早期诊断，具有非常重要的临床价值． 近年来，蛋白质组学的飞速发展为疾病发病机制及生物标志物研究提供了新的技术平台．蛋白质 组学研究的经典技术是双向电泳(Two·dimensional 大量蛋白复合物表达定量检测的技术，受到广泛的研究和应用．将其与质谱(M鹪s 结合，在寻找疾病特异标志物、研究发病机制、治疗和新药研制等方面具有重要作用．目前的研究发 现，癫痫与脑内多种蛋白表达异常有关，国外学者¨。71应用2DE蛋白组学技术对癫痫患者的脑组织进 行了差异蛋白组学研究，发现了一些差异表达蛋白，涉及细胞骨架异常、突触功能改变、线粒体功能 障碍及离子通道异常等，此外还有与颅内血管渗出或出血相关的血浆蛋白．但以上研究还处于初级阶 段，且癫痫相关蛋白质组学研究较少．本文以癫痫患者脑组织为研究对象，应用蛋白组学(2一DE及质 谱)技术筛选并鉴定癫痫差异蛋白，探讨其在癫痫发生及发展过程中的作用，为癫痫的发病、诊断和治 疗开辟了新思路，提供了新线索． 1 实验部分 1．1试剂、仪器及样品来源 3～lO，非线性(Non·line盯，NL)，24 固相pH梯度干胶条IPGgtrip[pH cm]、固相pH梯度胶条缓 冲液(IPGB，pH 收稿日期：20lOJD4明． 大学基础研究与重点培育专项基金(批准号：10)【PY04)资助． 联系人简介：孙志岭，男，博士，副教授，主要从事蛋白质组学研究．E—mail：8zl@njutcm．ed_u．∞ 万方数据 No．10 孙志岭等：蛋白质组学技术筛选与鉴定癫痫疾病的差异蛋白质 脂糖均为Amre8co进口分装．序列修饰后胰蛋白酶(Modi6ed calibration (Peptide 所用水均为去离子水． 双向电泳第一向采用IPG DaltⅡ垂直电泳系统和ImageS— phor等电聚焦仪，第二向采用的Ettarl 2D c肌ne一Ⅲ光学扫描仪及Im