鸡卵清蛋白基因第一内含子与3′-调控区对外源基因表达的调控作用.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, February 25; 24(2): 333-338 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 研究简报 3 - 房浩霞, 王安平, 高波, 孙怀昌 , , 225009 : 探明鸡卵清蛋白基因(ov)第一内含子和 3 ′-调控区对目的基因表达水平的影响, 为鸡输卵管表达载体的构建提 供科学依据。用牛生长激素基因(BGH)poly A 序列替换鸡输卵管表达载体中ov 3 ′-调控区, 用限制酶消化法逐步删减第 一内含子序列, 获得5 个表达人组织激肽释放(hK1)cDNA 的鸡输卵管表达载体, 分别命名为pOV2K 、pOV3K 、pOV4K 、 pOV5K 和pOV6K 。经翅静脉给产蛋鸡注射聚乙烯亚胺包裹的相同拷贝数重组载体, 通过蛋清中酶活性定量检测评价不 同载体的表达水平。结果表明: 受控于3.0kb ov 5 ′-和3 ′-调控区的pOV2K 表达的重组酶活性明显高于用BGH poly A 替 换3 ′-调控区的pOV3K; 无内含子的pOV6K 表达水平显著低于含不同长度第一内含子的pOV3K 、pOV4K 和pOV5K, 重 组酶表达水平随第一内含子的缩短呈逐渐下降趋势。该试验结果表明 ov 第一内含子和 3 ′-调控区对目的基因在鸡输卵 管细胞中的表达具有正调节作用, 应当包括在鸡输卵管表达载体中。 : 鸡卵清蛋白基因, 调控区, 输卵管表达载体, 人组织激肽释放酶 The Regulatory Effect of the First Intron and 3 -Regulatory Region of Ovalbumin Gene on Transgene Expression Haoxia Fang, Anping Wang, Bo Gao, and Huaichang Sun College of Veterinary Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China Abstract: We studied the influence of the first intron and 3 ′-regulatory region of ovalbumin gene (ov) on oviduct-specific transgene expression. The 3 ′-regulatory region in the oviduct-specific expression vector containing human tissue kallikrein (hK1) cDNA was replaced with bovine growth hormone (BGH) poly A, and the first intron was deleted by restriction enzyme digestion, resulting in five new vectors pOV2K, pOV3K, pOV4K, pOV5K and pOV6K. After mixing with polyethylen