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生物表面活性剂产生菌筛选与优化 答辩人：梁佳琦 班级：制药一班 学号 指导老师：马晓静 项目介绍 项目进程 项目计划 项目介绍 生物表面活性剂可分为糖脂、脂肽和脂蛋白、脂肪酸和磷脂、聚合物和全胞表面本身等五大类。此次我的课题重点研究糖脂和脂肽类生物表面活性剂。 生物表面活性剂不仅具有化学表面活性剂具有的各种表面性能,而且还拥有下列优点:①选择性广,对环境友好;②庞大而复杂的化学结构使得表面活性和乳化能力更强;③分子结构类型多样,具有许多特殊的官能团,专一性强;④原料在自然界广泛存在且价廉;⑤发酵生产是典型的“绿色”工艺等。 生物表面活性剂具有广泛的市场前景。自入市以来受到各个领域的广泛关注，在石油开采、药物、食品、化妆品、个人卫生用品、环境保护及其他工业领域展示了独特的应用前景。 本次毕业设计的任务是糖脂和脂肽类生物表面活性剂产生菌的筛选与优化。 项目进程 1.初筛： (1).取样： a.来源： 垃圾堆，菜市场，多处油菜花地，及长菌的除油污海绵等 b.方法： 从油田土壤中，去其表层大约5cm的土层，取其下层土壤。 长菌海绵取其长菌部位富集培养。 项目进程 (2).生物表面活性剂产生菌的培养： a.首先用富集培养基培养样品，并进行两次转接培养 b.将菌悬液稀释适当倍数，用稀释涂平板法培养出不同菌株 c.挑取不同形态的单菌落进行斜面培养 d.用发酵培养基发酵分别培养各菌株 项目进程 复筛：排油圈的测定 产生排油圈则证明培养液中存在生物表面活性剂，反之，则证明该培养液中无生物表面活性剂。 项目进程 项目计划 液滴坍塌法 测定是在一个有96个微槽的微孔板上进行，此种方法需要很少的样品量，能够测量较大的有效浓度范围，且不需要特殊的设备。 鉴别糖脂类和脂肽类（特征显色法） 糖脂的显色剂为苯酚-硫酸试剂，糖脂显棕色斑点；脂 肽的显色剂为0.5％茚三酮溶液，脂肽显红色。 项目计划 菌株的优化： A.碳源：葡萄糖、植物油、可溶性淀粉、乳糖 B.氮源：尿素、牛肉膏、氯化铵、硝酸 C.温度：20℃、30℃、37℃、45℃、55℃ D.pH：3、4、5、6、7、8、9、10 E.装液量：30mL、50mL、80mL、100mL、120mL 项目介绍 选取土样，制成培养基 平板涂布分离 稀释涂平板法纯化 排油圈测定 表面张力测定 液滴坍塌法测定 薄层层析法 脂肽类 糖脂类 碳源 氮源 温度 pH 装液量 初筛 复筛 鉴别 优化 项目进程 到目前为止共筛了7次菌株，其中有3次实验失败。其余实验中共筛出15株菌株，其中排油圈直径超过3cm的共有6株。1~2cm的有7株，1cm以下的有2株。